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詳細介紹
實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
【產(chǎn)品名稱】奔馬赭霉探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Ochroconis gallopava
【產(chǎn)品編號】YSP7023
【包裝規(guī)格】50T
【預期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
?
PCR實驗方法步驟：
奔馬赭霉探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
97%5g25g6羥基奈酚 3,6,7三葡萄糖苷110156methotrexate
氨基三乙 訂購|咨詢 規(guī)格： 50mg 細胞表面趨化因子受體8抗體 MMP-4 ELISA Kit 基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒
Proanthocyanidins阿莫西林相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格：規(guī)格：人載脂蛋白A5(apo-A5)CLIA試劑盒 0.2ml
Ntn1(Human Netrin1) ELISA Kit 人軸突生長誘向子1CAS號：478烯利檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒30766224
98%25g100g5,6,7,4'四羥基黃 6,7二葡萄糖苷120127Hexokinase II
吉莫斯特;吉嘧啶 質(zhì)量規(guī)格：>98%,二氫嘧啶脫氫酶(DPD)抑制劑 Gimeracil
Bergenin阿莫西林相關(guān)物質(zhì)B標準品規(guī)格：規(guī)格：人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)CLIA試劑盒 0.2ml
人瘦素(Leptin)FBXL17 FBXL17蛋白抗體規(guī)格:96T/48TAmpicillin Trihydrate規(guī)格:50mgIκB激酶α檢測試盒20mg人結(jié)腸癌細胞，HCT116細胞1x10^6cells
D蟲熒光素游離5mg
硫(分析標準品,>99%(GC）) 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,>99%(GC） Diphenyl sulfide
Bile salt No.7BR蓋他病抗體檢測試盒20mg白細胞介素1受體拮抗檢測試盒Interleukin2
D蟲熒光素游離5mg
補體成分4a(C4a)重組蛋白英文名稱：Recombinant Complement Component 4a (C4a)
Bile salt from sheepBR可溶性補體激活產(chǎn)物SC5b9檢測試盒20mg白細胞介素2檢測試盒Interleukin23
D蟲熒光素游離5mg
9,10-二基蒽(標準品) 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 9,10-Diphenylanthracene
Bile salt from oxBR，60%賴氫啶啉檢測試盒20mg白細胞介素23檢測試盒Interleukin4
奔馬赭霉探針法熒光定量PCR試劑盒鳥嘌呤 CAS號： 73405 規(guī)格： HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢
L鳥氨鹽鹽 CAS號： 3184132 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鳥苷 CAS號： 118003 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
尿素 CAS號： 57136 規(guī)格： HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢
牛鵝去氧膽 CAS號： 516358 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
耐斯糖 CAS號： 13133078 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
牛熊去氧膽 CAS號： 14605222 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
牛 CAS號： 107357 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
米力農(nóng) CAS號： 78415722 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
馬兜鈴 CAS號： 25274275 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
牡荊內(nèi) CAS號： 61263498 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
毛地黃素 CAS號： 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
麥芽糖 CAS號： 69794 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
3O沒食子酰粘 CAS號： 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
木犀草素5O葡萄糖苷 CAS號： 20344461 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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