詳細介紹
規格:1×10?cells/T25培養瓶
貨號:YS-02X9815
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產品僅用于科研
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養基;優質胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞最好在對數生長期,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據不同的菌類和用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。
Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 膠體金離子標記小鼠抗慶大單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.5ml(35nm-40nm)
Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
銜接蛋白β抗體 beta Adaptin/AP2 0.1ml
ZADH1 英文名稱: 鋅結合乙醇脫氫酶結構域蛋白1抗體 0.2ml
DYRK1A 英文名稱: 絲酸/蘇酸蛋白激酶MNB抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ER-beta(ser87) 磷酸化雌受體β抗體 規格 0.1ml
Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
ZO-1 peptide 胞質緊密粘連蛋白1抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環素蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PCDHGB4 原鈣粘蛋白γB4抗體 規格 0.2ml
IL1R1 Kit Human 人 IL1R1 / CD121a ELISA配對抗體 ELISA
THRB1 英文名稱: 甲狀腺受體β抗體(THβ1,THβ2) 0.2ml
Phospho-cdc2 (Thr14) 英文名稱: 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 0.1ml
Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環素蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Dog IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml
RMD2 英文名稱: 微管動力調節蛋白2抗體 0.2ml
丙型肝炎病毒-C區抗體 HCV-Core 0.1ml
PKB/AKT-1 /FITC 熒光素標記蛋白激酶B抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KB1(Ser427) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 規格 0.1ml
Bovine IgM (親和純化) IgMMulti-class antibodies規格: 1mg
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1PIPES;1,4-哌二乙磺酸育亨賓DNA末端平滑補缺同位素([35S]dATP)聚合酶標記試劑盒
4,4-二硫二吡啶鳶尾黃素三聯重復子延展度同位素([γ32P]ATP)酶標記法檢測試劑盒
2,2'-二硫二吡啶原堿同位素[α32P]dCTP聚合酶標記微衛星擴增試劑盒
4-甲基原兒茶同位素[γ32P]ATP酶標記微衛星擴增試劑盒
MOPSO, Na;3-嗎啉-2-羥基磺酸鈉原兒茶酸同位素標記放射活性TCA檢測試劑盒
MOPSO;3-嗎啉-2-羥基磺酸原花青素B1隨機引物DNA探針同位素標記產物*雙鏈制備試劑盒
3-(N-啉)磺酸鈉鹽原花青素B2同位素標記放射活性濾膜法檢測試劑盒
3-(N-啉)磺酸半鈉鹽原花青素B3同位素標記放射活性離心柱檢測試劑盒