詳細介紹
公司產品僅供科研實驗產品屬性:
產品名稱:肝素酶(HPSE)重組蛋白
物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Recombinant Heparanase (HPSE)
HPA; HPR1; HPSE1; HSE1; Endo-glucoronidase;
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::細胞核, 分泌 預測分子量:17.6kDa 實際分子量:20kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Pro400~Ile543 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性狀:凍干粉 純度:> 97% 等電點:9.9 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規格10μg50μg200μg1mg5mg |
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標簽選擇:
親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。
不同的系統步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達系統的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達載體的構建
c. 無內毒素的質粒抽提
d. 細胞瞬時轉染
e. 表達小試,條件優化
f. 表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
原核表達系統的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測
誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。
操作步驟 :
根據使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現用現加)。
1、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 把切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作
特點:
標記:標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性,將與抗體共價結合是一種非常簡便、直接的標記方法。
酶標記:酶標記抗體是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成,其應用范圍非常廣泛,結果即時可見、敏感性高。
熒光標記:熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一,產品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團經恰當的激光可發光, 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細胞水平定位的方法。
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應用類型: Other英文名稱: Histone H3 (Tri Methyl K36)英文別名: H3K36me3; Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36); Histone H3(Tri Methyl Lys36); Tri methyl Histone H3(Lys36); Tri methyl Histone H3(K36); H3 histone family member E pseudogene; H3 histone family, member A; H3/A; H31_HUMAN; H3F3; H3FA; Hist1h3a; HIST1H3B; HIST1H3C; HIST1H3D; HIST1H3E; HIST1H3F; HIST1H3G; HIST1H3H; HIST1H3I; HIST1H3J; HIST3H3; histone 1, H3a; Histone cluster 1, H3a; Histone H3 3 pseudogene; Histone H3.1; Histone H3/a; Histone H3/b; Histone H3/c; Histone H3/d; Histone H3/f; Histone H3/h; Histone H3/i; Histone H3/j; Histone H3/k; Histone H3/l; H3.1; H3/d; H3C1; H3C10; H3C11; H3C12; H3C2; H
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