詳細介紹
商品介紹:
酶與激酶 物種:Homo sapiens (Human,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::n/a 預測分子量:41.7kDa 實際分子量:-(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Tyr21~Leu374 (Accession # Q8IVL8) with 緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.) 性狀:凍干粉 純度:> 95% 等電點:- 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規格10μg50μg200μg1mg5mg |
公司產品僅供科研使用,不得用于臨床!
產品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
羧肽酶O(CPO)重組蛋白 | Recombinant Carboxypeptidase O (CPO) | Homo sapiens (Human,人) |
蛋白表達及純化:
1.培養500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
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操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養細胞蛋白提取
1. 貼壁培養的細胞,吸去培養基后,加入10mL/150mm培養板的冷PBS洗兩次,每次振搖數次以盡量去除培養液;
2. 懸浮培養的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,再用10mL/150mm培養板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Phospho-Doublecortin (Ser47)產品名稱: 雙皮質su抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse
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應用類型: Other英文名稱: ERK2英文別名: Mitogen-Activated Protein Kinase 1;
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Phospho-PERK (Thr980)產品名稱: 蛋白激mei樣內質網激mei抗體產品別名: p-PERK(Thr982); PERK(Phospho Thr982); PERK(Phospho T982);
應用類型: Other英文名稱: Calretinin英文別名: 29 kDa calbindin; CAB 29; CAB29; CAL 2; CAL2; CALB 2; CALB2; Calbindin 2 29kDa; Calbindin 2; Calbindin D29K; Calbindin2; CR; CALB2_HUMAN; Calretinin.
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注意事項:
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。
2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續操作。
4、本產品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作