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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Apoptosis Signal Regulating Kinase 1 ( |
| 種屬 | Homo sapiens (Human，人) | 規格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
| 品牌 | 研生 |
詳細介紹
公司產品僅供科研實驗產品屬性：
產品名稱：凋亡信號調節激酶I(ASK1)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant Apoptosis Signal Regulating Kinase 1 (ASK1)
MAP3-K5; MAP3K5; ASK1; MAPKKK5; MEKK5; Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase 5; MAPK/ERK kinase kinase 5
酶與激酶
細胞凋亡
物種：Homo sapiens (Human，人) 來源：原核表達 宿主E.coli 內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位：：細胞質 預測分子量：32.2kDa 實際分子量：32kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽：Gly681~Glu936 with N-terminal His Tag 緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300） 性狀：凍干粉 純度：> 97% 等電點：6.7 應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規格10μg50μg200μg1mg5mg |
特點：
標記：標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性，將與抗體共價結合是一種非常簡便、直接的標記方法。
酶標記：酶標記抗體是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成，其應用范圍非常廣泛，結果即時可見、敏感性高。
熒光標記：熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一，產品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團經恰當的激光可發光， 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況，主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色，是一種非常好的亞細胞水平定位的方法。
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標簽選擇：
親和標簽：蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類：一類是短肽類標簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。
不同的系統步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：
真核表達系統的重組蛋白表達步驟：
a. 選擇表達載體和宿主細胞（常用的CHO和HEK293）
b. 表達載體的構建
c. 無內毒素的質粒抽提
d. 細胞瞬時轉染
e. 表達小試，條件優化
f. 表達分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
原核表達系統的重組蛋白表達步驟：
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶，蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶，則需要變復性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白；表達蛋白的分析、純化、檢測
誘導表達成功后，表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當，按一般的實驗步驟做沒太大的問題。
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操作步驟 ：
根據使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用（PMSF 現用現加）。
1、樣品前處理：
a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。
c)對于組織樣品： 把切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
2、后處理：
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作
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