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技術文章

原代細胞判斷之形態學觀察法

閱讀:1136          發布時間:2017-11-2

原代細胞成活率,判斷之形態學觀察法:

1、細胞內出現顆粒或空泡。

2、細胞內如果出現顆粒物質,表明細胞處于非健康狀態。

3、同樣,細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。

 細胞喪失雙折射性:

    如果發生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環),則提示該細胞已經死亡,即zui終干枯死亡。

    如果發生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損,甚至死亡。

    怎樣去除死細胞?單層培養的細胞死亡后,一般會漂浮起來,因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞。

細胞成活率檢測實驗

即刻檢測實驗——

染料柜染實驗:原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞;生長液;0.25%胰酶;PBSA.非滅菌材料即:血細胞計數板;生存力染料;巴斯德吸管;顯微鏡;手執計數器。

操作步驟:

1、用胰蛋白酶消化或離心,重懸制備高深度的細胞懸液

2、取一塊干凈的血細胞計數板,將蓋玻片固定在適當位置上。

3、將一<滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻/li>

4、加至血細胞計數板的計數室中。

5、靜置1~2min(但不要放置很久,否則活細胞會受到損傷而吸收染料)。

6、將計數板置于顯微鏡下,用10倍物境找到計數網格。

7、計數細胞總及著色細胞的數目。

8、清洗血細胞計數板,放入盒內。

  原代細胞實驗分析-計算未著色細胞的百分數,該數字即為本方法所得出的細胞生存力百分數。據統計,原代培養細胞成活率一般為50%~90%。細胞系一般為90%~100%存活。凍融細胞一般為50%~80%存。
曲氟胸苷相關物質A標準品        20mg    14599-46-3 
曲康唑標準品    Terconazole    200mg    67915-31-5 
曲米帕明標準品        25mg    315-69-5 
曲司氯銨標準品    Trospium Chloride     100mg    10405-02-4 
曲司氯銨相關物質A標準品        20mg    76-93-7 
曲沃前列素標準品        3ml    
曲沃前列素雜質標準品        1.5ml    
去甲替林鹽酸鹽標準品    Nortriptyline Hydrochloride    200mg    894-71-3 
去甲西泮標準品    Nordazepam CIV    50mg    1088-11-5 
去羥米松標準品    Desoximetasone    200mg    382-67-2
去氫膽酸標準品    Dehydrocholic Acid    200mg    81-23-2
去氫孕酮標準品    Dydrogesterone    200mg    152-62-5
原代細胞

 

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