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資源名稱: 忍冬木層孔菌保存
種屬:Phellinuslonicerinus(Bond)BondetSing.
安全等級 1
模式菌株 no
培養方法
培養基 17
生長條件 25-28℃
忍冬木層孔菌保存檢測方法:
1.將病人標本和/或液狀對照品放至室溫(15-30℃),輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。
2.將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標本中,*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水,將拭子靠在收集容器的邊上,排去多余的液體。
3.檢測卡內部的右手邊有兩個孔,將拭子插入底部的孔中(拭子孔),穩步向前推,使整個拭子頭在上部的孔中可見,不要取出拭子。
4.垂直持放A試劑瓶,高出檢測卡上方1/2到1英寸,慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。
5.立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯,封閉檢測卡,過15分鐘在窗口判讀結果。15分鐘后讀取的結果可能不準確。然而,有些陽性病人不到15分鐘就出現可見樣品線。
忍冬木層孔菌保存注意事項:
1. 取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。
2. 凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO)對細胞不是*無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作 較大,因此,必須在1-2min內使凍存液*融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產品。
3. 離心前須加入少量培養液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。
4. 離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養瓶中進行培養,第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除 DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉速和時間,轉的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉過了活細胞會受壓過大, 死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液 體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行復蘇,結果無有異常。
5. 細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15m培養液,而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。
6. 復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。
7. 加培養基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度,從如果你加培養基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響 細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是 10%DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。
130505-10 RNA 溶解液 10mL
130506-1.5 海藻糖溶液,1.5M,PCR 級 1.5mL
130508-96 無內毒素槍頭,200 μL 1盒
130509-50 磁珠血液 DNAout 50 次
130510-50 磁珠植物 DNAout 50 次
130511-10 JM110 感受態細胞 10×100μL
130512-50 一站式磁珠法動物 mRNAout 50 次
130513-2 無包被磁珠 2mL
130514-2 硅基磁珠 2mL
130515-2 氨基磁珠 2mL
130516-2 羧基磁珠 2mL
130517-2 環氧基磁珠 2mL
130518-2 醛基磁珠 2mL
130519-2 巰基磁珠 2mL
130520-2 殼聚糖磁珠 2mL
130521-2 鏈霉親和素磁珠 2mL
130525-1 蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2 1mL
130526-10 細菌蛋白酶抑制劑 10mL
130527-1 哺乳動物蛋白酶抑制劑 1mL
130528-1 植物蛋白酶抑制劑 1mL
130529-1 酵母蛋白酶抑制劑 1mL