詳細介紹
雙位點HC-kit受體細胞株;DMF7圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 雙位點HC-kit受體細胞株;DMF7圖片
形態特性 圓形
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞株由陳松森教授實驗室建立;雙位點Cys151和Cys183突變的c-Kit基因轉染293ET細胞,篩選獲得。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;IL-3 or rhGM-CSF
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
雙位點HC-kit受體細胞株;DMF7圖片細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
雙位點HC-kit受體細胞株;DMF7圖片質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,*進口來源,*保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
雙位點HC-kit受體細胞株;DMF7圖片操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
23-0260-25 Genistein( 酪氨酸蛋白激酶抑制劑 ) 25mg
23-0270-5 Glucosamine( 胰島素抵抗誘導劑 ) 5g
23-0280-1 GSH( 抗氧化劑 ) 1g
23-0290-5 H-89.2HCL(PKA 抑制劑 ) 5mg
23-0300-1 H-89(PKA 抑制劑 ) 1mg
23-0310-1 HDAC 抑制劑 1g
23-0320-1 Hemoglobin(NO 清除劑 ) 1g
23-0330-18 Insulin 18mg
23-0340-250 Ionomycin( 鈣離子載體 ) 250nmol
23-0350-50 KT5823(PKG 抑制劑 ) 50μg
23-0360-5 L-Arginine(NO 前體 ) 5g
23-0370-20 L-Canavanine(iNOS 抑制劑 ) 20mg
23-0380-1 L-Citrulline(NO 中間體 ) 1g
23-0390-10 Leptomycin B( 出核轉運抑制劑 ) 10μg
23-0400-1 L-Glutathione (reduced form)( 抗氧化劑 ) 1g
23-0410-0.5 Lipoic acid( 抗氧化劑 ) 0.5g
23-0420-200 L-NAME(eNOS 抑制劑 ) 200mg
23-0430-5 L-NMMA( 總 NOS 抑制劑 ) 5mg
23-0440-10 Lovastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 ) 10mg
23-0450-0.5 LPS(TLR4 激活劑 ) 0.5mg
23-0460-1 LY294002(PI3K 抑制劑 ) 1mg
23-0470-1 Metformin(LKB1-AMPK 激活劑 ) 1g
23-0480-1 MG-132(Proteasome 抑制劑 ) 1mg
23-0490-100 Monensin ( 蛋白轉運抑制劑 ) 100mg
23-0500-2 NAC( 抗氧化劑 ) 2g
23-0510-10 Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 ) 10g
23-0520-5 Nocodazole( 有絲分裂抑制劑 ) 5mg
23-0530-1 NS-2028(sGC 抑制劑 ) 1mg
23-0540-1 NS-398(COX-2 抑制劑 ) 1mg
23-0550-1 Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 ) 1mg
23-0560-10 Okadaic acid 鉀鹽 (PP1 和 PP2A 抑制劑 ) 10μg
23-0570-100 Paclitaxel(TAXOL)( 紫杉醇 ) 100μL
23-0580-2 PD 98059(MAPKK 抑制劑 ) 2mg
23-0590-1 PDTC(NF-κB 抑制劑 / 抗氧化劑 ) 1g
23-0600-1 Phorbol12-myristate13-acetate(PKC 激活劑 ) 1mg
23-0610-5 Pifithrin-a(p53 抑制劑 ) 5mg
23-0620-1 PMA/TPA (PKC 激活劑 ) 1mg
23-0630-5 Pyrrolidinedithioca rbamin acid.ammonium salt(NF-kB 抑制劑 / 抗氧化劑 ) 5mg
23-0640-100 Rapamycin(FRAP/mTOR 抑制劑 ) 100μg
23-0650-1 SB203580(p38MAPK 抑制劑 ) 1mg
23-0660-10 Simvastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 ) 10mg
23-0670-50 S-Methyl-ITU.sulfate(iN0S 抑制劑 ) 50mg
23-0680-100 SMT(iNOS 抑制劑 ) 100mg
23-0690-1 SNP(NO 供體 ) 1g
23-0700-65 SOD( 抗氧化酶 ) 65KU
23-0710-1 Sodium Butyrate(HDAC 抑制劑 ) 1g
23-0720-2 Sodium orthovanadate( 磷酸酯酶抑制劑 ) 2g
23-0730-5 SP600125(JNK 抑制劑 ) 5mg
23-0740-1 Spermidine.trihvdrochloride(nNOS 抑制劑 ) 1g
23-0750-0.1 Staurosporine(PKC 抑制劑 ) 0.1mg
23-0760-2 Superoxide dismutase( 抗氧化酶 ) 2mg