詳細介紹
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產品名稱:脂肪酸合成酶(FAS)微量法測試盒
規格 : 100管/96樣
測試方法: 微量法
貨號:GOY-01S6366
分類:輔酶Ⅱ系列
商品介紹:
細胞內脂質的積累是脂質合成與分解失衡的結果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,會導致細胞內脂質積累。FAS是脂肪酸合成關鍵酶,催化乙酰和丙二酰而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達于各種組織細胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。
測定原理
以NADPH為還原力,FAS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成長鏈脂肪酸;通過測定NADPH的減少量,即可推算出FAS活性。
實驗中所需儀器和用品
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液槍和雙蒸水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
圖
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
Tubulin-Tracker Red( 微管紅色熒光探針 )40μL dCTP 溶液,2.5mM2mL
Zinquin 乙酯5mg dCTP 溶液,100mM0.5mL
1400W(iNOS 抑制劑 )2mg DB3.1 感受態細胞10×100μL
5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL dATP 溶液,2.5mM2mL
Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)20μL dATP 溶液,100mM0.5mL
Cycloheximide50mg CFDA SE ( 細胞增殖示蹤熒光探針 )5mg
Cyclosporin A( 免疫抑制劑 /PP2B 抑制劑 )50mg cDNA 第一鏈合成試劑盒50 次
Decitabine 地西他濱5mg cDNA 第一鏈合成試劑盒10 次
Doxorubicin(Adriamycin) 100μL cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次
Etoposide( *泊苷 / 鬼臼乙叉苷 )100μL Catechin hydrate( 抗氧化劑 )0.5g
大鼠γ-半合成酶(γ-GCS)elisa檢測試劑盒
大鼠δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)elisa分析檢測試劑盒
大鼠δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)elisa檢測試劑盒
大鼠δ樣蛋白4(δLL4)elisa檢測試劑盒
大鼠阿黑皮素原(POMC)elisa分析檢測試劑盒
脂肪酸合成酶(FAS)微量法測試盒植物種屬鑒定 PCR Mix 8100 次 大提柱式血液 DNAout4次
植物種屬鑒定 PCR Mix 9100 次 大提柱式細菌 RNAout5次
植物種屬鑒定 PCR Mix 10100 次 大提柱式細菌 DNAout4次
植物種屬鑒定 PCR Mix 11100 次 大提柱式細菌 DNAout( 含 )4次
轉 ESPES 基因植物 PCR Mix100 次 大提柱式土壤 DNAout4次
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。