詳細介紹
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產品名稱:硝酸還原酶(NR)(NADH速率法)微量法測試盒
規格 : 100管/96樣
測試方法: 微量法
貨號:GOY-01S6477
分類:氮代謝系列
商品介紹:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
測定原理
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;NADH在 340 nm 有最大吸收峰,通過測定NADH減少速率來表示NR活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
3號染色體開放閱讀框25抗體 細胞周期蛋白SG2N抗體
轉錄激活因子MYB抗體 細胞周期蛋白N端結構域蛋白2抗體
原癌基因cMAF抗體 細胞周期蛋白N端結構域蛋白1抗體
19號染色體開放閱讀框46抗體 細胞周期蛋白G相關激酶抗體
8號染色體開放閱讀框70抗體 細胞周期蛋白3抗體
大鼠繆勒管抑制物質/抗繆勒管激素(MIS/AMH)elisa檢測試劑盒
大鼠膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)elisa檢測試劑盒
大鼠膜聯蛋白A2(ANXA2)elisa檢測試劑盒
大鼠膜聯蛋白A5(Annexin A5)elisa檢測試劑盒
大鼠膜聯蛋白A5(Annexin A5)elisa檢測試劑盒
硝酸還原酶(NR)(NADH速率法)微量法測試盒去離子甲酰胺100mL 間充質干細胞脂防細胞分化生長因子5mL
BLOTTO 溶液100mL 間充質干細胞生長因子5mL
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL 間充質干細胞生長因子 - 無血淸5mL
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )1.5mL 間充質干細胞軟骨細胞分化生長因子5mL
Denhardt 溶液,50×100mL 間充質干細胞成骨細胞分化生長因子5mL
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。