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詳細(xì)介紹
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
HotStar DNA Polymerase | 500U|2500U | GOY-F10313 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
HotStar DNA Polymerase是抗Taq酶單克隆抗體和WE0101 Taq DNA Polymerase的混合制品，適用于Hot Start PCR。使用Taq酶抗體進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，高溫變性前由于Taq酶抗體與Taq酶結(jié)合抑制DNA聚合酶活性，能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。Taq酶抗體在PCR反應(yīng)初的DNA變性步驟中變性，DNA聚合酶活性恢復(fù)，達(dá)到熱啟動(dòng)效果。使用本品無需特殊地對(duì)Taq酶抗體失活處理，可以在常規(guī)PCR反應(yīng)條件下使用。 ??HotStar DNA Polymerase具有5'→3'DNA聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，無3'→5'外切酶活性，酶延伸速度2 kb/min，可以擴(kuò)增長(zhǎng)度達(dá)5 kb的片段。擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3'端附有一個(gè)“A"堿基，因此可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品具有延伸速度快、擴(kuò)增效率高的特點(diǎn)，主要適用于PCR法擴(kuò)增DNA片段、DNA序列測(cè)定等實(shí)驗(yàn)。 注意： 1)一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度。 2)延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定。 3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。 儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。 |
DNA提取流程圖：
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
堿性蛋白酶測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/24樣 Tetracaine 中文名：鹽酸丁卡因 分子式：C15H25ClN2O2
堿性成纖維生長(zhǎng)因子 英文名稱： basic fibroblast growth factor 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： b-FGF 4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone 90-93-7 中文名：四乙基米氏酮 分子式：C21H28N2O
堿性0酸酶（AKP）檢測(cè) Acid phosphatase (ACP) detection Polypodine B 中文名：水龍骨甾酮B 分子式：C27H44O8
甲狀腺球蛋白抗體 英文名稱： Human Thyroglobulin Aibody 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： TGAb Pefloxacin mesylate 70458-95-6 中文名：甲磺酸培氟 分子式：C18H24FN3O6S
甲型流感H5N1 英文名稱： Influenza A H5N1(Avian Flu) HA 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： H5N1 HA Prosapogenin A 19057-67-1 中文名：薯蕷次皂苷A 分子式：C39H62O12 度：% 關(guān)鍵詞： 細(xì)胞毒活性; 麥冬; 螺甾烷; 甾苷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
5(6)-ROX ;5(6)-羧基-X-羅丹明鹽酸鹽 5(6)-Carboxy-X- rhodamine; 5(6)-ROX 質(zhì)量規(guī)格：>95%,進(jìn)分 Humanai-livercytosolaibodytype1,LC1ELISA試劑盒人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
5-羥基-2-金剛烷酮 5-hydroxy-2-adamantanone 質(zhì)量規(guī)格：>98.5% 植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒10
右佐 Es 質(zhì)量規(guī)格：>99% Humanvanillylmandelicacid,VMAELISAKit人垂草扁桃酸(VMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
右佐(標(biāo)準(zhǔn)品) Es 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌侵蛋白(MTPN)ELISA試劑盒 ，英文名： MTPN ELISA Kit
醋酸曲安奈德 Triamcinolone Acetonide Acetate 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 人脂氧素A4(LXA4)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanLipoxinA4,LXA4ELISAKit 96T/48T
常山酮 Halofuginone 質(zhì)量規(guī)格：提取含量5%以上 大鼠細(xì)胞分裂周期基因(CDC)試劑盒 Rat cell division cycle gene,CDC ELISA Kit
戈米辛D(標(biāo)準(zhǔn)品) Gomisin D 質(zhì)量規(guī)格：＞98.0% (LC&T)，標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatoponinIELISAKit大鼠心肌肌鈣蛋白I(cTnI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
1-甲基 1-Methyl Xanthine 質(zhì)量規(guī)格：>98% 海洋動(dòng)物(蝦貝類)活性線粒體分離試劑盒10/50
6-羧基-X-羅丹明 6-Carboxy-X- rhodamine; 6-ROX 質(zhì)量規(guī)格：>95% ELISAKitFPB人血纖肽/纖維蛋白肽B規(guī)格：48T/96T
西侖吉肽 Cilengitide,EMD121974,NSC 707544 質(zhì)量規(guī)格：>97%,integrin抑制劑 小鼠肌腱蛋白X(TNX)ELISA試劑盒 ，英文名： TNX ELISA Kit
FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合酶組織單胺氧化酶（MAO）總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞單胺氧化酶（MAO）總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
體液氧化酶活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
組織氧化酶活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞氧化酶活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
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