詳細介紹
DNA提取流程圖:
下列是產品的訂購信息!產品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 貨號 |
2×PCR MasterMix | 20μL×400次 | GOY-F10284 |
產品詳細介紹:
本制品中含有2×Taq DNA Polymerase,2×PCR Buffer,2×dNTP,只需加入適量引物、模板和水即可進行PCR擴增。大大簡化了PCR操作,使操作更加快捷,也減少了PCR操作過程中可能導致的污染,使PCR的重復性更好。 產品用途: 利用2×PCR Master Mix可以進行各種常規的PCR擴增,特別適合用于定性和半定量的PCR擴增,以及2kb以下DNA片段的T載體克隆。 產品特點: 本產品可以擴增出長達8kb的片段,但通常更適合用于擴增2kb以下的DNA片段。 本產品穩定性高,經測試,反復凍融15次后對PCR的擴增效果無顯著影響。 保存:-20℃,至少一年有效。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP/α1M)酶聯吸附測定試劑盒 Human AMBP (Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor) ELISA Kit 2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid 104239-97-6 中文名: 分子式:C19H28INO3
人T細胞活化連接蛋白elisa試劑盒 人T細胞活化連接蛋白試劑盒 規格型號:96T/48T 人T細胞活化連接蛋白試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人T細胞活化連接蛋白試劑盒、人T細胞活化連接蛋白elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Sitafloxacin 127254-12-0 中文名:西他 分子式:C19H18ClF2N3O3
人P糖蛋白elisa試劑盒 人P糖蛋白試劑盒 規格型號:96T/48T 人P糖蛋白試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人P糖蛋白試劑盒、人P糖蛋白elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Schleicheol 1 中文名: 分子式:C30H52O2
人preptinelisa試劑盒 人preptin試劑盒 規格型號:96T/48T 人preptin試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人preptin試劑盒、人preptin elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Sulfamonomethoxine 38006-08-5 中文名:磺胺間甲氧鈉 分子式:C11H11N4NaO3S 度:98.0%
人Pirin蛋白(PIR)酶聯吸附測定試劑盒 Human PIR (Pirin) ELISA Kit 2-Fluoroadenosine 146-78-1 中文名: 分子式:C10H12FN5O4
滅草煙,咪唑 Imazapyr acid 質量規格:>98% Rat soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
咪唑(標準品) Imazapyr acid 質量規格:HPLC>99%,標準品 Humanadaptormoleculeapoptoticpeptidaseactivatingfactor1,APAF1ELISAKit 人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
石膽酸(標準品) Lithocholic Acid 質量規格:>97(GC),標準品 Humanai-hepatitisDvirusaibody,ai-HDVELISA試劑盒人抗丁型肝炎病毒抗體(ai-HDV)ELISA試劑盒規格:96T/48T
氧嗪酸鉀 Potassium Oxonate 質量規格:>98% 植物0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測試劑盒20
氧嗪酸鉀(標準品) Potassium Oxonate 質量規格:>98%,標準品 HumanVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規格:96T/48T
異丁司特 Ibudilast 質量規格:>98% 小鼠基質金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒 ,英文名: MMP-5 ELISA Kit
異丁司特(標準品) Ibudilast 質量規格:HPLC>99%,標準品 大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA檢測試劑盒Rathemeoxygenase2,HO-2ELISAKit 96T/48T
吉西他濱 Gemcitabine 質量規格:>98%,free base 人0酸化微管相關蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)試劑盒 Human hyper phosphorylated MAPT ELISA kit
沙利度胺(反應停) Thalidomide 質量規格:>98% RatThioredoxin,xELISAKit大鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA試劑盒規格:96T/48T
沙利度胺(標準品) Thalidomide 質量規格:HPLC>98%,標準品 LAMBDA噬菌體DNA氯化銫化試劑盒10
PCR MasterMix細菌胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測試劑盒
組織胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測試劑盒
細胞胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測試劑盒
植物胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性比色法定量檢測試劑盒
真菌/酵母胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CG
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)