詳細介紹
DNA提取流程圖:
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中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 貨號 |
dTTP Solution | 250μl | GOY-F10278 |
產品詳細介紹:
dTTP即2’-deoxythymidine 5’-triphosphate,中文名為脫氧胸苷三磷酸,常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反應、DNA測序、DNA標記等各種常規分子生物學反應。 分子式:C10H14N2O14P3Na3 分子量:548.1(酸形式的分子量為482.1) 大吸收波長:267nm。 本dTTP溶液用純水配制,并用高純度NaOH溶液調節pH值至7.0,濃度為100mM,即100mmol/L。 本dTTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。 本dTTP溶液經測試,可以直接用于PCR等各種常規分子生物學反應。 儲存條件:-20℃。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
人抗單核細胞抗體(AMA)ELISAKit Timosaponin AIII 41059-79-4 中文名:知母皂苷AIII 分子式:C39H64O13 度:98.5% 關鍵詞: 知母; 螺甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫
人抗α-胞襯蛋白抗體IgGelisa試劑盒 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG試劑盒 規格型號:96T/48T 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人抗α-胞襯蛋白抗體IgG試劑盒、人抗α-胞襯蛋白抗體IgGeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Aloe-emodin 中文名:蘆薈大黃素 分子式:C15H10O5
人晶體蛋白βelisa試劑盒 人晶體蛋白β試劑盒 規格型號:96T/48T 人晶體蛋白β試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人晶體蛋白β試劑盒、人晶體蛋白βeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Periplogenin 514-39-6 中文名:杠柳苷元 分子式:C23H34O5
人金葡菌腸elisa試劑盒 人金葡菌腸試劑盒 規格型號:96T/48T 人金葡菌腸試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人金葡菌腸試劑盒、人金葡菌腸elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Lonidamine 50264-69-2 中文名:氯尼達明 分子式:C15H10Cl2N2O2 度:98.0% 關鍵詞:
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISAKit 3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 中文名: 分子式:C17H23NO5 度:98.0%
A 83-01;A83-01 A8301 質量規格:>98%,BR 大鼠轉鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA檢測試劑盒Ratansferrieceptor,TFRELISAKit 96T/48T
Amresco 進分瓊脂粉 Agar 質量規格:BR,進分 人成纖維細胞生長因子13(FGF-13)試劑盒 Human FGF-13 ELISA Kit
氟伏沙明 Fluvoxamine 質量規格:>98%,油狀 RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit大鼠氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒規格:96T/48T
醋酸鋅(二水) Zinc acetate 質量規格:AR,>98% JNK/SAPK(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
舒巴坦鈉 Sulbactam 質量規格:BR,>99% PlaIndole-3-aceticacid,IAAELISA試劑盒植物吲哚乙酸(IAA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
舒巴坦鈉(標準品) Sulbactam 質量規格:HPLC>98%,標準品 小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒 ,英文名: TIMP-2 ELISA Kit
甘草酸(β型),18beta-甘草酸 18-beta-glycyrrheticacid 質量規格:>98% 大鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISA檢測試劑盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit 96T/48T
甘草酸(β型),18beta-甘草酸(標準品) 18-beta-glycyrrheticacid 質量規格:HPLC>98%,標準品 人成纖維細胞生長因子10(FGF10)試劑盒 Human FGF10 ELISA Kit
OXOID胰蛋白胨 Tryptone 質量規格:BR,進口 Rattarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA試劑盒規格:96T/48T
β-萘黃酮 β-Naphthoflavone 質量規格:>99%,進分 JNK/SAPK蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25
dTTP溶液(100mM)組織硫氧還蛋白還原酶2(mito thioredoxin reductase 2)活性比色法定量檢測試劑盒
細胞硫氧還蛋白還原酶2(mito thioredoxin reductase 2)活性比色法定量檢測試劑盒
組織硫氧還蛋白還原酶1(cytosolic thioredoxin reductase 1)活性比色法定量檢測試劑盒
細胞硫氧還蛋白還原酶1(cytosolic thioredoxin reductase 1)活性比色法定量檢測試劑盒
組織硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reduct
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)