詳細介紹
下列是產品的訂購信息!產品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 貨號 |
DNA Shuffling Kit | 10次 | GOY-F10259 |
產品詳細介紹:
DNA Shuffling即DNA分子的體外同源重組,它是一種分子水平上的定向進化(directed evolution)技術,它以一個或多個基因為起始材料,通過先隨機斷裂成小片段,再進行互為模板和引物的PCR(無外加引物),后再進行常規PCR(外加引物)等處理,后得到含有大量DNA重組突變的PCR產物。 產品特點: 1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板,無需單獨準備各成分。 2.操作手冊經過優化,1-2天即可完成,節省大量優化時間。 3.本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。 儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。 |
DNA提取流程圖:
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
人整合素連接激酶1elisa試劑盒 人整合素連接激酶1試劑盒 規格型號:96T/48T 人整合素連接激酶1試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人整合素連接激酶1試劑盒、人整合素連接激酶1 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 2-Aminothiazol-4-acetic acid 中文名:2-氨基噻唑-4-乙酸 分子式:C5H6N2O2S
人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfone 4273-98-7 中文名:2-氨基二苯砜 分子式:C12H11NO2S 度:98.0%
人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISAKit 2-Aminophenyl phenyl sulfide 1134-94-7 中文名:2-氨基二苯硫醚 分子式:C12H11NS 度:98.0%
人整合素αⅤβ3(IegrinαⅤβ3)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfone 4273-98-7 中文名:2-氨基二苯砜 分子式:C12H11NO2S
人真胰島素(TI)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfide 中文名:2-氨基二苯硫醚 分子式:C12H11NS 度:98.0%
DL-苦杏仁酸 DL-Mandelic acid 質量規格:AR Humanai-gangliosideaibody,GM1ELISA試劑盒人抗神經節苷脂抗體(GM1)ELISA試劑盒規格:96T/48T
抗壞血酸;C Ascorbic acid;vitamin C 質量規格:AR;>99% 植物可溶性酸性蔗糖轉化酶(acidinvease)活性比色法定量檢測試劑盒(液泡)20
C(標準品) Ascorbic acid;vitamin C 質量規格:含量測定 HumanVitaminDReceptor,VDRELISAKit人D受體(VDR)ELISA試劑盒規格:96T/48T
十八胺; 十八烷基胺; 硬脂胺 Octadecanamine 質量規格:AR 小鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒 ,英文名: PTH ELISA Kit
山梨酸 Sorbic acid 質量規格:AR,99% 大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA檢測試劑盒Ratalpha-L-fucosidase,AFUELISAKit 96T/48T
盧立康唑 Luliconazole 質量規格:>98%,BR 人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)試劑盒 Human PRF1/PFP ELISA Kit
5-硝基-1,10-菲咯啉;5-硝基鄰菲啰啉 5-Nitro-1,10-phenanthroline 質量規格:>97%,BR RatsolubleToll-likereceptor6,sTLR-6ELISAKit大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒規格:96T/48T
鐵冬青酸(標準品) Rotundic acid 質量規格:HPLC≥98%,標準品 INSULIN蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25
酚藍鈉 Bromophenol blue salt 質量規格:AR Peanagglinin,PNAELISA試劑盒花生凝集素(PNA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
百里香酚蘭鈉 Thymol blue salt 質量規格:AR 小鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA 試劑盒
DNA Shuffling試劑盒細胞磷酸腺苷脫氨酶(AMPD)活性比色法定量檢測試劑盒
血液蘋果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測試劑盒
組織蘋果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測試劑盒
細胞蘋果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測試劑盒
通用型蘋果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測試劑盒