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詳細介紹
DNA提取流程圖：
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中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 貨號 |
5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester | 10mg | GOY-F10183 |
產品詳細介紹：
活細胞熒光示蹤探針CDCFDA, SE已被廣泛證實，用CDCFDA 活細胞綠色熒光探針標記細胞能有效確定總細胞的數量和一個樣本中存在多少活細胞。流式細胞術結合熒光染色法是分析非均質細胞種群的有力工具。 FDA 和它的衍生物無熒光分子進入細胞后被胞內無特異性的酯酶所水解產生熒光。這些熒光產物只能積聚在具有完整細胞膜的細胞中。因此，死細胞無完整細胞膜不能被染色。FDA 具備精確地膜轉運動力學和胞內水解作用或者類似物（CDCFDA）相關的細胞功能，因此可以通過熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測FDA 標記的細胞。過FDA 熒光標記的細胞在細胞系或者菌株中存在變化，可能是由于不同胞內酯酶的活性所造成的。活細胞熒光示蹤探針CDCFDA, 琥珀酰亞胺酯是一個胺化FDA 衍生物，可以用來制備各種FDA偶聯物。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
兔白細胞介素35elisa試劑盒 兔白細胞介素35試劑盒 規格型號：96T/48T 兔白細胞介素35試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔白細胞介素35試劑盒、兔白細胞介素35 elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 中文名：4-苯甲酸 分子式：C13H10O2 度：98.0%
兔白細胞介素-35（IL-35）ELISA試劑盒 4β-Hydroxywithanolide E 中文名：4β-羥基醉茄內酯E 分子式：C28H38O8 度：98.0%
兔白細胞介素-35（IL-35）ELISA試劑盒 4β-Hydroxywithanolide E 中文名：4β-羥基醉茄內酯E 分子式：C28H38O8
兔白細胞介素1elisa試劑盒 兔白細胞介素1試劑盒 規格型號：96T/48T 兔白細胞介素1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔白細胞介素1試劑盒、兔白細胞介素1elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 中文名：4-苯甲酸 分子式：C13H10O2
兔白細胞介素15elisa試劑盒 兔白細胞介素15試劑盒 規格型號：96T/48T 兔白細胞介素15試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔白細胞介素15試劑盒、兔白細胞介素15elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 92-92-2 中文名：4-苯甲酸 分子式：C13H10O2 度：98.0%
D-核糖(標準品) D-(-)-Ribose 質量規格：>99%,標準品 大鼠乙酰(Ach)ELISA檢測試劑盒Ratacetylcholine,ACHELISAKit 96T/48T
D-核糖 D-(-)-Ribose 質量規格：>98%,BR 人蛋白C(PC)試劑盒 Human Protein C ELISA Kit
二硫蘇糖(DTT) DL-Dithiothreitol 質量規格：>99%,分子生物學級 RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌3激酶(PI3K)ELISA試劑盒規格：96T/48T
D(+)-松二糖 D(+)-Turanose 質量規格：>98%,BR GSK-3ALPHA蛋白共沉淀分析試劑盒5
D-果糖-1,6-二三鈉鹽 D-Fructose 1,6-bisphosphate salt 質量規格：>98%,BR Mousethioredoxieductase,xRELISA試劑盒小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA試劑盒規格：96T/48T
海帶多糖；昆布糖 (來自褐藻類) Laminarin from Laminaria digitata 質量規格：BR，日本進口分裝 小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒 ，英文名： PA-IgG/M/A ELISA Kit
(1:250)，粉 Pancreatin 質量規格：酶活1:250,BR 大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA檢測試劑盒RatThromboxaneB2,TXB2ELISAKit 96T/48T
木瓜蛋白酶(800u/mg) Papain 質量規格：800u/mg 人蛋白ATP1B4(ATP1B4)試劑盒 Human ATP1B4 ELISA Kit
木瓜蛋白酶(2000u/mg) Papain 質量規格：2000u/mg;200萬u/g Ratpigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒規格：96T/48T
(1:2500) Pancreatin 質量規格：酶活1:2500,BR GSK-3BETA蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25
細胞質標記染料,長效示蹤CDCFDA,SE細胞Akt/PKB激酶總活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織Akt3/PKBγ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞Akt3/PKBγ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織Akt2/PKBβ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞Akt2/PKBβ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
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