詳細介紹
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
產品屬性:
產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X1396 |
名稱 小鼠神經少突膠質前體細胞
2.組織來源:腦組織
3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介:
小鼠神經少突膠質前體細胞分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(灰質)覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布于中樞神經系統,在銀浸染標本中,少突膠質細胞比星狀膠質細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。少突膠質細胞(oligodendrocyte)是中樞神經系統(CNS)的成髓鞘神經膠質細胞,其發育要經歷少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為三型。但是,細胞發育是一個連續的過程,其形態、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限,因此,其分類是相對的。這三型分別為:Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A(pre-O2A progenitor cell)。細胞呈圓形,表面光滑,直徑約3μm,體外混合培養時成簇生長在星形膠質表面,具有很強的分裂增殖潛力,表達GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)等。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起,極少數為單極突起,直徑約7μm,有一定的分裂增殖能力。體外培養時為雙潛能細胞,既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質,故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,O2A)。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ(淋巴雜交瘤株A2B5產生GQ的抗體),故常用A2B5抗體標記O2A。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力,為分裂終期細胞。直徑約10μm。根據其形成髓鞘的能力,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞。不成熟的OL胞體常伸出4~5條較粗大突起,表面還殘留有A2B5標記物,同時也表達O1-O4抗原,無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網,大量表達半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,GC)、蛋白脂蛋白(proteio lipid protein,PLP)、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)等,有對軸突髓鞘化的能力。體外培養的少突膠質細胞前體細胞(簡稱少突膠質細胞前體細胞)包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞,前兩者具有增殖能力。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠神經少突膠質細胞采用消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
6.質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠神經少突膠質前體細胞經A2B5免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2天半量換液1次
生長特性 貼壁
細胞形態 雙極、多極形
傳代特性 不傳代,不增值,存活1-2周
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
實驗報告:
產品僅用于科研一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
土壤 DNAout30 次 小膠質細胞生長因子5mL
土壤 DNAout100 次 小 RNA 克隆試劑盒10 次
柱式土壤 DNAout50 次 硝酸纖維素膜,13×20cm1張
大提柱式土壤 DNAout4次 硝酸纖維素膜,13×20cm1張
柱式水樣 DNAout50 次 消解酶 ( 溶細胞酶 ) 干粉100mg
人Spondin-2 elisa分析檢測試劑盒
人SPARC相關模塊化鈣結合蛋白2(SMOC2)elisa分析檢測試劑盒
人SPARC相關模塊化鈣結合蛋白1(SMOC1)elisa分析檢測試劑盒
人SMAD3 elisa分析檢測試劑盒
人SMAD2 elisa分析檢測試劑盒
小鼠神經少突膠質前體細胞小鼠促甲狀釋放激素(TRH)elisa檢測試劑盒
小鼠促卵泡素(FSH)elisa分析檢測試劑盒
小鼠促卵泡素(FSH)elisa檢測試劑盒
小鼠促卵泡素(FSH)elisa檢測試劑盒
小鼠促泌素(SCGN)elisa檢測試劑盒
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。