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名稱(chēng) DC細(xì)胞
產(chǎn)品概述
DC細(xì)胞,即樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic Cell)是正常人體內(nèi)存在的一種具有強(qiáng)大的抗原提呈功能的一類(lèi)特殊的細(xì)胞,被喻為機(jī)體的“天然佐劑"。2011年10月3日,瑞典卡羅琳醫(yī)學(xué)院在斯德哥爾摩宣布,2011年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予加拿大科學(xué)家拉爾夫·斯坦曼、生于盧森堡的法國(guó)籍科學(xué)家朱爾斯·霍夫曼以及美國(guó)科學(xué)家布魯斯·博伊特勒,以表彰他們?cè)诿庖邔W(xué)領(lǐng)域取得的革命性研究成果。其中,斯坦曼(RalphM·Steinman)教授,因其在免疫系統(tǒng)領(lǐng)域以及樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cell簡(jiǎn)稱(chēng)DC)等一系列研究發(fā)現(xiàn),獨(dú)享獎(jiǎng)金的一半,另外一半由其他兩位科學(xué)家分享。被譽(yù)為“DC細(xì)胞之父"的斯坦曼教授在2006年就查出胰腺癌晚期。在醫(yī)學(xué)上,晚期胰腺癌的惡化程度高,生存期不會(huì)超過(guò)6個(gè)月。然而,斯坦曼教授正是在接受了以他自己的研究成果“樹(shù)突細(xì)胞"(DC細(xì)胞)為依據(jù)的細(xì)胞后,成功地將生命延長(zhǎng)。
DC細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制如下:
a)DC可以高表達(dá)MHC-Ⅰ類(lèi)和MHC-Ⅱ類(lèi)分子,MHC分子與其捕獲加工的腫瘤抗原結(jié)合,形成肽-MHC分子復(fù)合物,并遞呈給T細(xì)胞,從而啟動(dòng)MHC-I類(lèi)限制性CTL反應(yīng)和MHC-Ⅱ類(lèi)限制性的CD4+Thl反應(yīng)。同時(shí),DC還通過(guò)其高表達(dá)的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD40等)提供T細(xì)胞活化所必須的第二信號(hào),啟動(dòng)了免疫應(yīng)答。
b)DC與T細(xì)胞結(jié)合可大量分泌IL-12、IL-18激活T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)CTL生成,主導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答,利于腫瘤清除;激活穿孔素P顆粒酶B和FasL/Fas介導(dǎo)的途徑增強(qiáng)NK細(xì)胞毒作用;
c)DC分泌趨化因子(Chemotactic Cytokines,CCK)專(zhuān)一趨化初始型T細(xì)胞促進(jìn)T細(xì)胞聚集,增強(qiáng)了T細(xì)胞的激發(fā)。保持效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤部位長(zhǎng)期存在,可能通過(guò)釋放某些抗血管生成物質(zhì)(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影響腫瘤血管的形成。上述CCK進(jìn)一步以正反饋旁分泌的方式活化DC,上調(diào)IL-12及CD80、CD86的表達(dá);同時(shí)DC也直接向CD8+T細(xì)胞呈遞抗原肽,在活化的CD4+T細(xì)胞輔助下使CD8+T細(xì)胞活化,CD4+和CD8+T細(xì)胞還可以進(jìn)一步通過(guò)分泌細(xì)胞因子或直接殺傷,增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。
DC刺激免疫反應(yīng)有以下特點(diǎn):
1.樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是人體內(nèi)功能強(qiáng)的專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞,DC相當(dāng)于信使,將抗原信息傳遞給T細(xì)胞,并具有活化T細(xì)胞的功能,很少量就可以激發(fā)強(qiáng)大的T細(xì)胞反應(yīng)。
2.可致敏輔助T細(xì)胞的多種細(xì)胞因子,顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖,以激活體內(nèi)靜止?fàn)顟B(tài)的初始型T細(xì)胞(而巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞僅能刺激已活化的或記憶性T細(xì)胞)。
3.幫助重建腫瘤患者對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視功能。機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有完備的監(jiān)視功能,但腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)有抵抗和抑制作用,使得免疫細(xì)胞不能識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。在DC疫苗培養(yǎng)中用腫瘤抗原誘導(dǎo)DC使其致敏后,可將其抗原信息傳遞給T細(xì)胞,使T細(xì)胞重新識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%胰消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞分裂周期調(diào)控蛋白45抗體
細(xì)胞分裂周期蛋白CDC123抗體
鋅指蛋白830抗體
中心體蛋白質(zhì)76抗體
中心體蛋白152抗體
人γ分泌酶elisa檢測(cè)試劑盒
人γ氨基丁酸(GABA)elisa檢測(cè)試劑盒
人β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)elisa檢測(cè)試劑盒
人β抑制蛋白2(ARRB2)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)elisa檢測(cè)試劑盒
DC細(xì)胞小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠肺部激活調(diào)節(jié)趨化因子(PARC)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。