LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL供應(yīng)產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞，適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株，用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。 DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Zα-互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后，發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid，提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲病毒。此外，DH10Bac 細(xì)胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)現(xiàn)象，用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。菌株基因型為：F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL供應(yīng)規(guī)格及成分：

LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL供應(yīng)使用方法：
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床， 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋，如分成 3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后，倒置平板， 37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。

pEZ BAC (HpaI linearized)
pFastBacHT C（pFastBacHTC）
pFUGW-H1 empty vector(pFUGWH1emptyvector)（60908-3431）
pGene/V5-His C (GeneSwitch)(pGeneV5HisC(GeneSwitch))
pGL4.25[luc2CP minP]
pGreenPuro (CMV)（60908-4033）
pHom-1(pHom1)
pIC20R
pIRESneo2（60908-4290）
pJQ200SK
pKO100
pLenti-C-tRFP(pLentiCtRFP)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
紅曲霉 Monascus anka
人宮頸細(xì)胞英文名稱：HeLa
HNE2, 人鼻咽細(xì)胞系 Human
鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus
蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis
SW-13(人腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
意大利青霉 Penicillium italicum
龍舌蘭刺盤孢 Colletotrichum agaves
結(jié)晶紫染色液規(guī)格：100ml
人少突膠質(zhì)細(xì)胞 Human
液化沙雷氏菌 Serratia liquefaciens
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
HuTu-80(人十二脂腸腺)5×106cells/瓶×2
瑞士桿菌 Lactobacillus helveticus
吸水鏈霉菌應(yīng)城變種 Streptomyces hygroscopicus var. yingchengensis
大鼠食管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL供應(yīng)pLKO.1 puro(pLKO1puro)
pLVX-Het-Mem1(pLVXHetMem1)
pMAMPF3
pMCSG29 (linearized)
pMCSG64 (linearized)
pMirTarget