詳細介紹
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次特點使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產物。
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次特點產品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
產品介紹:
規格及成分:
phrGFP II-1
pIEx-1(pIEx1)
pIZT/V5-His(pIZTV5His)(60908-4340)y
pJW168
pL3-TRE-MCS-polyA-2L(pL3TREMCSpolyA2L)
pLenti4/V5-DEST(pLenti4V5DEST)(60908-4508)
pLOVE empty vector(pLOVEemptyvector)
pLVX-MetLuc Reporter
pMCentr3
pMCSG35 (linearized)
pMCSG70 (linearized)
pMLB1034
pMTchi5/4269C(pMTchi54269C)宇佐美曲霉變種 Aspergillus usamii var.
季也蒙假絲酵母 Candida guilliermondii
小鼠破骨細胞*培養基100mL
大鼠大隱靜脈平滑肌細胞*培養基100mL
銅綠假單胞菌 Pseudomonas aeruginosa
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
LoVo(人大腸細胞)5×106cells/瓶×2
嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
擬囊體側耳 Pleurotus cystidiosus
小鼠成年表皮角質形成層細胞*培養基100mL
人表皮角質形成細胞*培養基100mL
熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
HFT-8810(人胎兒胸腺細胞株)5×106cells/瓶×2
中國臺灣根霉 Rhizopus formosensis
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
人羊膜間充質基質細胞
人淋巴成纖維細胞*培養基100mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
ZR-75-30(人腺細胞)5×106cells/瓶×2
炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius
pNTAP-C(pNTAPC)(60908-5210)
pPbac
pPD95_73(pPD9573)
pPro18-cm(pPro18cm)
pQE-15(pQE15)