詳細(xì)介紹
dNTP 溶液 ,10mM5mL*使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測(cè)是否得到預(yù)計(jì)長(zhǎng)度的 PCR 產(chǎn)物。
dNTP 溶液 ,10mM5mL*產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
pEcoli-6xHN-GFPuv(pEcoli6xHNGFPuv)(60908-2555)
pESC-URA(pESCURA)(60908-2754)y
pET-41a(+)(pET41a)(60908-2807)y
pET28-SBP-TEV(pET28SBPTEV)
pFA6a-3HA-TRP1(pFA6a3HATRP1)
pFL26
pGADT7-T (pGADT7T)(60908-3470)
pGEX-KG(pGEXKG)(60908-3850)
pGL4.42[luc2P HRE Hygro]
PhageScript藤黃微球菌 Micrococcus luteus
苜蓿中華根瘤菌
RBL-2H3(大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
屎腸球菌 Enterococcus faecium
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 Mouse
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
側(cè)耳 Pleurotus sp.
小鼠表皮角化細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
微白色放線菌轉(zhuǎn)換變種 Actinomyces albidus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
康寧木霉
人食管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
Ca Ski, 人宮頸細(xì)胞
phrGFP-1 (Vitality)(phrGFP1 )
pIEx-5(pIEx5)
pJ4omega
pK18mobSacB(60908-4395)
pLA7