詳細介紹
恒河猴腎細胞;RM-1說明書【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱恒河猴腎細胞;RM-1說明書
形態特性 上皮樣,多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一獼猴的腎組織。1982年由中國醫學科學院昆明醫學生物學研究所建立。
培養條件 M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P6
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 B類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
ARPE-19(人視網膜上皮細胞)5×106cells/瓶×2
芽孢桿菌屬 Bacillus sp.
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
Poly-D-lysine溶液規格:2mggersion
粘紅酵母 Rhodotorula glutinis
黑木耳 Auricularia auricula
中國倉鼠肺細胞英文名稱:CHL
小鼠腸上皮細胞*培養基100mL
平山正青霉 Eupenicillium hirayamae
費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii
NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2gersion
沙地青霉 Penicillium arenicola
草菇 Volvariella bombycina
小鼠胚胎成纖維細胞英文名稱:3T3A31
大鼠尿道上皮細胞*培養基100mL
土曲霉 Aspergillus terreus
抗生鏈霉菌 Streptomyces antibioticus
Li-7(人肝細胞)5×106cells/瓶×2
嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermophilus
金頂側耳 Pleurotus citrinopileatusBromoform 三溴烷 75-25-2
GENTIOBIOSE 龍膽二糖 554-91-6
1,6-Diisocyanatohexane 1,6-己二異酸酯 822-06-0
(S)-(-)-2-Azetidinecarboxylic acid (S)-(-)-2-羧基環丁胺 2133-34-8
Trichloroacetonitrile 三乙 545-06-2
PALMITIC ACID SODIUM SALT 棕櫚酸 408-35-5
TAPSO N-三(羥基)氨基-2-羥基丙磺酸 68399-81-5
3-Methoxyphenol 3-氧基酚 150-19-6
O-Benzyl-L-tyrosine methyl ester hydrochloride O-芐基-L-酪氨酸酯酸 34805-17-9
Hyaluronic acid 透明質酸 9004-61-9
Sodium p-styrenesulfonate 對乙磺酸 2695-37-6
Zinc nitrate 酸鋅 7779-88-6
Dichloro(1,5-cyclooctadiene)platinum(II) (1,5-環二)二化鉑(II) 12080-32-9
Copper sulfate pentahydrate 硫酸銅,五水 7758-99-8
Dichloroethane 二乙烷 1300-21-6
Sodium dithionite 連二亞硫酸 7775-14-6
3-Ethoxyaniline 間氨基 621-33-0
thiosemicarbazide 硫代氨基脲 79-19-6
p-Nitrobenzamide 對基酰胺 619-80-7
Tryptic Soy Broth with Yeast Extract 胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE)
5-Bromo-4,6-dichloropyrimidine 5-溴-4,6-二嘧啶 68797-61-5
Acid Black 2 色素(水溶) 8005/3/6
Trichloroethanol 2,2,2-三乙醇 115-20-8