詳細介紹
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1說明書【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1說明書
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 1957年,Puck TT從成年中國倉鼠卵巢的活檢組織建立了CHO細胞,CHO-K1是CHO的一個亞克隆。CHO-K1的生長需要脯氨酸。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1:3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體 20-26
使用權限 A類
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1說明書細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1說明書質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1說明書操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
100mg 堿性磷酸酶標記親和素
100g 檸檬酸,二水
1000μL 山羊抗兔 IgG(H+L),辣根過氧化物酶標記
肌球蛋白 CAS100684-32-0 100mg
小鼠抗 c-Myc 標簽單抗 130575-100 100μL
250mg 直鏈淀粉
10g L- 苯丙氨酸
250g 麥芽浸粉
10×100μL T1 感受態細胞
丙烯葡聚糖凝膠 S-100 HR CAS65546-95-4 150mL
亞氨二介質 131059-10 10mL
50 次 柱式血清血漿 RNAout
25g 硫柳汞
100g 瓊脂糖
1000 支 1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 袋裝帶芯 )
兔肌動蛋白 CAS51005-14-2 1mg
組蛋白 3.1 小鼠單抗 130571-1000 1000μL
非凍型血液 RNA 保存液 111202-100 100mL
1 g 糜蛋白酶原
5g 3- 苯甲酰丙酸
5mL 滑膜細胞生長因子
100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚磷酸 (BCIP)
人基因組 DNA 混合液 131034-100 100μg
分子雜交爐 120930-1 1臺
直接紅81 分子式: 675.6 分子量: C29H19N5Na2O8S2 英文名稱: Direct red 81 CAS號: 2610/11/9
日落黃 分子式: 452.37 分子量: C16H10N2Na2O7S2 英文名稱: Sunset yellow CAS號: 2783-94-0
酸性嫩黃G 分子式: 380.35 分子量: C16H13N4NaO4S 英文名稱: Acid yellow G CAS號: 6359-82-6
(3-BroMophenyl)(2,4,6-triMethylphenyl)iodoniuM triflate 分子式: 551.2 分子量: C16H15BrF3IO3S 英文名稱: (3-BroMophenyl) (2,4,6-triMethylphenyl) triflate iodoniuM CAS號: 1203709-76-5
4-(3-三氟甲基)哌啶鹽酸鹽 分子式: 265.7 分子量: C12H15ClF3N 英文名稱: 4- (3- three trifluoromethyl phenyl) piperidine hydrochloride CAS號: 6652-16-0
L-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽 分子式: 173.25 分子量: C9H19NO2 英文名稱: L- l-norvaline tert butyl ester hydrochloride CAS號: 13211-31-9
溴百里香酚蘭 分子式: 624.38 分子量: C27H28Br2O5S 英文名稱: Bromothymol blue CAS號: 76-59-5
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1說明書蘇丹Ⅳ 分子式: 380.44 分子量: C24H20N4O 英文名稱: Su Dan CAS號: 85-83-6
酸性紫7 分子式: 566.47 分子量: C20H16N4Na2O9S2 英文名稱: Acid violet 7 CAS號: 4321-69-1
氯酚紅 分子式: 423.27 分子量: C19H12Cl2O5S 英文名稱: Chlorophenol red CAS號: 4430-20-0