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EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1002圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1002圖片
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞系來源于一無精癥男性的外周血。2010年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
Beraprost (sodium salt) (5 mg)2,3,3a,8b-tetrahydro-2-hydroxy-1-(3-hydroxy-4-methyl-1-octen-6-ynyl)-1H-cyclopenta[b]benzofuran-5-butanoic acid, monosodium salt; ML 1129|Procyclin|TRK 10Beraprost (sodium salt)
Leukotriene B3 (25 ug)5S,12R-dihydroxy-6Z,8E,10E-eicosatrienoic acid; LTB3; Leukotriene B3
Prostaglandin E2-d4 (5 mg)9-oxo-11α,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic-3,3,4,4-d4 acid; Dinoprostone-d4|PGE2-d4; Prostaglandin E2-d4
5-OxoETE-d7 (50 ug)5-oxo-6E,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic-6,8,9,11,12,14,15-d7 acid; 5-KETE-d7; 5-OxoETE-d7
6-trans-12-epi Leukotriene B4 (25 ug)5S,12S-dihydroxy-6E,8E,10E,14Z-eicosatetraenoic acid; 5(S),12(S)-DiHETE|6-trans-12-epi LTB4; 6-trans-12-epi Leukotriene B4
13-OxoODE (100 ug)13-oxo-9Z,11E-octadecadienoic acid; 13-KODE; 13-OxoODE
Sodium Acetate (500 dtn (4。1 g))Sodium Acetate
Corticosterone AChE Tracer (100 dtn)Corticosterone AChE Tracer
Latanoprost AChE Tracer (100 dtn)Latanoprost AChE Tracer
Vilogenin (carp) Standard (5 ea)Vilogenin (carp) Standard
9(S)-HpODE (100 ug)9S-hydroperoxy-10E,12Z-octadecadienoic acid; 9(S)-HpODE
Methionine Sulfoxide Positive Control (1 ea)Methionine Sulfoxide Positive Control
Sodium Acetate Stock Solution (3 M, pH 5。2) (250 mL)Sodium Acetate Stock Solution (3 M, pH 5。2)人骨髓間充質干細胞(hMSCs)
HCC38(人腺導管細胞)5×106cells/瓶×2
D/E中和瓊脂/D-E中性瓊脂/戴伊恩格利中和瓊脂/ D/E Neutralizing Agar衛生環境中微生物的分離培養, 消毒效果測定250克國產/進口
FaDu(人咽鱗細胞)5×106cells/瓶×2
GST標簽蛋白裂解液20 ug20μg、100μg
小鼠胰腺星狀細胞*培養基100mL
BRL-3A(大鼠正常肝細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肺成纖維細胞*培養基100mL
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒規格:500次
人小氣道上細胞*培養基100mL
KORSER氏枸櫞酸鹽肉湯/KORSER氏檸檬酸鹽肉湯/Korser Citrate Sodium Broth用于細菌的枸櫞酸鹽試驗100克國產/進口
人內臟脂肪細胞*培養基100mL
標準Ⅱ號營養瓊脂/標準2號營養瓊脂/Standard Ⅱ Nutrient Agar不含糖,可作血瓊脂基礎和傳代用250克國產/進口
人成纖維肉瘤細胞英文名稱:HT1080
聚蛋白胨/多聚蛋白胨/多價蛋白胨/PolypeptoneBR250/500/1000克國產/進口
大鼠小腸平滑肌細胞*培養基100mL
禽膽鹽/Bile salt from poultryBR25克國產/進口
Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2
氧化發酵試驗培養基/OF培養基/Hugh-Leifson培養基/HLGB細菌的氧化發酵試驗250克國產/進口
SF763(人腦瘤細胞)5×106cells/瓶×2
PAF C-16 (5 mg)1-O-hexadecyl-2-O-acetyl-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine; Plaet-activating Factor C-16; PAF C-16