人外周血淋巴細(xì)胞系；MC/CAR圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人外周血淋巴細(xì)胞系；MC/CAR圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞是由Ritts RE J從一名81歲白人男性漿細(xì)胞瘤患者外周血分離并建立。該細(xì)胞能夠表達(dá)免疫球蛋白，但沒有分泌能力，細(xì)胞表面也未檢測(cè)出免疫球蛋白。 
培養(yǎng)條件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C7
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR  STR鑒定
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

酵母 DNAout    50 次
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )    1.5mL
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )    1.5mL
酵母產(chǎn)孢培養(yǎng)基    100mL
酵母蛋白酶抑制劑    1mL
酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒    20 次
酵母粉    500g
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒    20 次
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒 ( 含轉(zhuǎn)化液 )    20 次
酵母浸膏    500g
酵母及產(chǎn)孢培養(yǎng)基    100mL
接頭 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)    5nmol
接頭 DNA(EcoR I-Sma I)    5nmol
接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)    5nmol
接頭 DNA(pSma I)    5nmol
接頭 DNA(Sal I-Sma I)    5nmol13，14-dihydro Prostaglandin F1α （50 mg）9。alpha。，11。alpha。，15S-trihydroxy-prostan-1-oic acid； PGFα|13，14-dihydro PGF1α； 13，14-dihydro Prostaglandin F1α
iPF2α-IV （25 ug）5（S），9。alpha。，11。alpha。-trihydroxy-1。alpha。，1。beta。，1。gamma。-trihomo-18，19，20-trinor-8。beta。-prosta-2Z，6E-dien-1-oic acid； iPF2α-IV
13，14-dihydro-15-keto Prostaglandin F2α isopropyl ester （1 mg）9。alpha。，11。alpha。-dihydroxy-15-oxo-prost-5Z-en-1-oic acid， isopropyl ester； 13，14-dihydro-15-keto PGF2α isopropyl ester； 13，14-dihydro-15-keto Prostaglandin F2α isopropyl ester
15（S）-Fluprostenol （10 mg）9α，11α，15S-trihydroxy-16-（3-（trifluoromethyl）phenoxy）-17，18，19，20-tetranor-prosta-5Z，13E-dien-1-oic acid； 15（S）-Fluprostenol
19（R）-hydroxy Prostaglandin F2α （1 mg）9α，11α，15S，19R-tetrahydroxy-prosta-5Z，13E-dien-1-oic acid； 19（R）-hydroxy PGF2α； 19（R）-hydroxy Prostaglandin F2α
Prostaglandin J2 （500 ug）11-oxo-15S-hydroxy-prosta-5Z，9，13E-trien-1-oic acid； PGJ2； Prostaglandin J2
Leukotriene B4 （500 ug）5S，12R-dihydroxy-6Z，8E，10E，14Z-eicosatetraenoic acid； LTB4； Leukotriene B4
6-keto Prostaglandin F1α-d4 （100 ug）6-oxo-9α，11α，15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic-3，3，4，4-d4 acid； 6-keto PGF1α-d4； 6-keto Prostaglandin F1α-d4
15（S）-HETE-d8 （50 ug）Techin； 15（S）-HETE-d8
5（S），15（S）-DiHETE （100 ug）5S，15S-dihydroxy-6E，8Z，10Z，13E-eicosatetraenoic acid； 5（S），15（S）-DiHETE
結(jié)晶紫    25g
芥子酸    1g
金胺 O    5g
金黃色葡萄菌 V8 蛋白酶    1mg