人外周淋巴細(xì)胞；U266B1圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人外周淋巴細(xì)胞；U266B1圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系是由N.K. Nilsson于1970年從一名53歲患有骨髓瘤男性的外周血中分離建立的。免疫學(xué)研究表明，該細(xì)胞和體內(nèi)骨髓瘤細(xì)胞表達(dá)相同的免疫球蛋白。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C8
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

JM83 菌種    1mL
肌    100g
肌苷    5g
肌球蛋白    100mg
肌酸激酶測(cè)試劑盒    24 T
姬姆色素染料    1g
基因列表    --
基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑    0.5 mL
激動(dòng)素    250mg
*熱穩(wěn)定單鏈結(jié)合蛋白    50μg 
即用型 EMSA 試劑盒    100 次
即用型 GFP 標(biāo)簽蛋白裂解液    100μL
即用型 PCR 檢測(cè)試劑盒系列    50T
即用型 PCR 試劑盒 2.0     1 mL
即用型 PCR 試劑盒 2.0     9 mL
即用型 PCR 試劑盒 3.0    1 mL
即用型 PCR 試劑盒 3.0    9 mL
即用型多重 PCR 試劑盒    50 次4α，9-Epoxy-3β-veratroyloxy-5β-cevan-4β，Veratridine
N-（7-cyano-6-（4-fluoro-3-（2-（3-（trifluoromethyl）phenyl）acetamido）phenoxy）benzo[d]thiazol-2-yl）cyclopropanecarboxamideTAK-632
N-KN-93
Aminooxoacetic acid sodium salt， Oxalic acid monoamide sodium salt， Oxamic acid sodium saltSodium Oxamate
6-CD437
2-[Methyl（tetrahydro-1，1-dioxido-3-thienyl）amino]-2-oxoethyl （E）-3-（3-nitrophenyl）prop-2-enoateCID-5951923
2，8-dibenzyl-6-（4-hydroxyphenyl）imidazo[1，2-a]pyrazin-3（7H）-one； 2-DeoxycoelenterazineCoelenterazine-h
Rabbit IgG， 100 ugRabbit IgG
Glutathione SepharoseGlutathione Sepharose
Bovine Serum Albumin – Heat Shock， Fatty Acid Free， pH 7.0Bovine Serum Albumin – Heat Shock， Fatty Acid Free， pH 7.0
Lipase Substrate （1。2 ml）Lipase Substrate
clasto-Lactacystin beta-lactoneclasto-Lactacystin beta-lactone
Bacterial Protein Extraction Reagent, EZLysEZLys Bacterial Protein Extraction Reagent
DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDaDiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDa
12-S)-HETE Lipid Maps MS Standard (250 ug)12-S)-HETE Lipid Maps MS Standard, 12S-hydroxy-5Z,8Z,1E,14Z-eicosatetraenoic acid
-+)-Goniothalesdiol (25 mg)-+)-Goniothalesdiol, 4,7-anhydro-2,3-dideoxy-7R-C-phenyl-D-xylo-heptonic acid, methyl ester
8-iso Prostaglandin A2 (10 mg)8-epi PGA2, 8-iso Prostaglandin A2, 9-oxo-15S-hydroxy-(8.beta.)-prosta-5Z,1,13E-trien-1-oic acid
EAM2201 (5 mg)JWH 21 N-(5-fluoropentyl) analog, EAM2201, (4-ethyl-1-naphthalenyl)[1-(5-fluoropentyl)-1H-indol-3-yl]-methanone
即用型封堵液 (NC )     50mL
即用型封堵液 (Nylon )    50mL
即用型高保真 PCR 試劑盒    1.5mL
即用型高保真 PCR 試劑盒    9mL
即用型藍(lán)白 T 載體 A 型 (T7-SP6，有 MCS)    20 次