詳細介紹
人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1圖片
形態特性 上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 腫瘤抑制基因: p53 + [PubMed: 9214605] pRB + [PubMed: 9214605] 一位正常男性前列腺組織切片的周圍區域的上皮細胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進行轉化,建立了RWPE-1 (ATCC CRL-11609) 細胞株 [PubMed: 9214605]. 在三維Matrigel培養時,在雄激素作用下,RWPE-1細胞形成腺胞并向培養基中分泌PSA。[PubMed: 11170142]. 當與Matrigel或基質細胞混合注射雄性裸鼠時,RWPE
培養條件 這株細胞的基本培養基作為Invitrogen (GIBCO)提供的kit的部分: 角化細胞無血清培養基K-SFM,kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細胞生長所需的兩種添加劑(牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長因子EGF)。 配制*生長培養基,需添加以下成分: 0.05 mg/ml BPE – 隨K-SFM提供 5 ng/ml EGF -隨K-SFM提供。
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 P(52+5)
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
丁酸鈉 1g
丁酰膽堿酯酶 500U
定影粉 1袋
動態顯色法內毒素定量試劑盒 48 次
動態濁度法內毒素定量試劑盒 1.7mL×10 支
動物 DNAout 100mL
動物 DNAout 250mL
動物 RNAout(TRIzol) 100mL
動物 RNAout(TRIzol) 250mL
動物上皮細胞生長因子 5mL
動物細胞核蛋白微量制備試劑盒 100 次
動物細胞核蛋白微量制備試劑盒 25 次
動物細胞裂解液 A 50mL
動物細胞裂解液 B 50mL
動物粒體純化試劑盒 ( 粗提 ) 15 次
動物粒體純化試劑盒 ( 精提 ) 15 次
動物粒體總蛋白提取劑盒 50 次
動物種屬鑒定 PCR Mix 1 100 次
動物種屬鑒定 PCR Mix 2 100 次
動物種屬鑒定 PCR Mix 3 100 次
動物種屬鑒定 PCR Mix 4 100 次1a,1b-dihomo Prostaglandin E1 (1 mg)9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-1a,1b-dihomo-prost-13E-en-1-oic acid; 1a,1b-dihomo PGE1; 1a,1b-dihomo Prostaglandin E1
N-pentadecanoyl-L-Homoserine lactone (5 mg)N-[(3S)-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-pentadec*; C15-HSL; N-pentadecanoyl-L-Homoserine lactone
(E)-C-HDMAPP (ammonium salt) (5 mg)P’-[(3E)-5-hydroxy-4-methyl-3-penten-1-yl]-isohypophosphoric acid, triammonium salt; (E)-1-Hydroxy-2-Methylbut-2-enyl 4-Diphosphate (ammonium salt); (E)-C-HDMAPP (ammonium salt)
PP2 (10 mg)3-(4-chlorophenyl)-1-(1,1-dimethylethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine; AGL 1879; PP2
Sphingosine-1-Phosphate Lyase Fluorogenic Substrate (5 mg)2S-ammonio-3R-hydroxy-5-((2-oxo-2H-chromen-7-yl)oxy)pentyl hydrogen phosphate; S1P Lyase Fluorogenic Substrate; Sphingosine-1-Phosphate Lyase Fluorogenic Substrate
CB-86 (10 mg)N-cyclopropyl-8-[3-(1,1-dimethylheptyl)-5-hydroxyphenoxy]-oct*; CB-86
Iso-Olomoucine (25 mg)2-[[7-methyl-6-[(phenylmethyl)amino]-7H-purin-2-yl]amino]-ethanol; Iso-Olomoucine
tetranor-PGJM (25 ug)8-((1R,2S)-2-(2-carboxyethyl)-5-oxocyclopent-3-en-1-yl)-6-oxooctanoic acid; tetranor-PGJ Metabolite; tetranor-PGJM
(+)-Warfarin (5 mg)4-hydroxy-3-[(1R)-3-oxo-1-phenylbutyl]-2H-1-benzopyran-2-one; (R)-Warfarin; (+)-Warfarin
(S)-Lisofylline (25 mg)3,7-dihydro-1-[5S-hydroxyhexyl]-3,7-dimethyl-1H-purine-2,6-dione; (+)-Lisofylline|(S)-LSF; (S)-Lisofylline
IWR-1-endo (5 mg)4-[(3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-hexahydro-1,3-dioxo-4,7-methano-2H-isoindol-2-yl]-N-8-quinolinyl-benzamide; IWR-1-endo
動物種屬鑒定 PCR Mix 5 100 次
動物種屬鑒定 PCR Mix 6 100 次