詳細介紹
人永生化表皮細胞;HaCaT圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人永生化表皮細胞;HaCaT圖片
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚,角蛋白、角化細胞交聯外膜蛋白、中間絲相關蛋白陽性。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 15%FBS
傳代方法 1:10~1:20傳代,每周換液2~3次
傳代情況 C2
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:9,11;D13S317:10,12;D16S539:9,12;D18S51:12;D19S433:13,14;D21S11:30.2;D2S1338:17,25;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:9,11;D8S1179:14;FGA:24;TH01:9.3;TPOX:11,12;vWA:16,17,OL;
同工酶
染色體 72~88
使用權限 A類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌 ) 96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 ) 96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長尖 ) 96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌長尖 ) 96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝長尖 ) 96 支
1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 袋裝 ) 1000 支
1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 袋裝帶芯 ) 1000 支
1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 盒裝 ) 100 支
1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 盒裝已滅菌 ) 100 支
1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 ) 100 支
10nt 隨機引物,0.5μg/μL 5μg
1400W(iNOS 抑制劑 ) 2mg
15mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD) 1個
15mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD) 1個
15mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD) 1個
15mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD) 1個
1A75 枯草宿主菌菌種 1mL
1μL 超微量分光光度計 1個
2-( 環己胺基 ) 乙烷磺酸 5g
2-(N- 嗎啉 ) 乙磺酸 10g
2,3,5 氯化三苯基四氮唑 1g25-hydroxy Vitamin D2 (1 mg)4-methylene-3-[(2E)-2-[(1R,3aS,7aR)-octahydro-1-[(1R,2E,4S)-5-hydroxy-1,4,5-trimethyl-2-hexenyl]-7a-methyl-4H-inden-4-ylidene]ethylidene]-cyclohexanol; Ercalcidiol|25-Hydroxyergocalciferol; 25-hydroxy Vitamin D2
2-Pyridylamide oxime (500 mg)N-hydroxy-2-pyridinecarboximidamide; Picolinic Acid Amidoxime; 2-Pyridylamide oxime
1a,1b-dihomo Prostaglandin E1 (5 mg)9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-1a,1b-dihomo-prost-13E-en-1-oic acid; 1a,1b-dihomo PGE1; 1a,1b-dihomo Prostaglandin E1
13,14-dihydro-15-keto-tetranor Prostaglandin D2 (10 ug)9α-hydroxy-11,15-dioxo-2,3,4,5-tetranor-prostanoic acid; 13,14-dihydro-15-keto-tetranor Prostaglandin D2
Chaetocin (1 mg)2,2’,3S,3’S,5aR,5’aR,6,6’-octahydro-3,3’-bis(hydroxymethyl)-2,2’-dimethyl-[10bR,10’bR(11aS,11’aS)-bi-3,11a-epidithio-11aH-pyrazi’,2’:1,5]pyrrolo[2,3-b]indole]-1,1’,4,4’-tetrone; Chaetocin
PP2 (5 mg)3-(4-chlorophenyl)-1-(1,1-dimethylethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine; AGL 1879; PP2
3-Methyladenine (25 mg)3-methyl-3H-purin-6-amine; NSC 66389|3-MA; 3-Methyladenine
CB-86 (50 mg)N-cyclopropyl-8-[3-(1,1-dimethylheptyl)-5-hydroxyphenoxy]-oct*; CB-86
Iso-Olomoucine (50 mg)2-[[7-methyl-6-[(phenylmethyl)amino]-7H-purin-2-yl]amino]-ethanol; Iso-Olomoucine
Programmed Cell Death Protein 4 (C-term) Blocking Peptide (200 ug)PDCD4; Programmed Cell Death Protein 4 (C-term) Blocking Peptide
Pseudolaric Acid B (10 mg)4a-(acetyloxy)-3-[(1E,3E)-4-carboxy-1,3-pentadien-1-yl]-3R,4S,4aS,5,6,9-hexahydro-3-methyl-1-oxo-7-methyl ester; 1H-4,9aR-ethanocyclohepta[c]pyran-7-carboxylic acid; PAB; Pseudolaric Acid B
ACS 67 (1 mg)7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-dihydroxy-2-[(3R)-3-hydroxy-5-phenylpentyl]cyclopentyl]-4-(3-thioxo-3H-1,2-dithiol-5-yl)phenyl ester, 5Z-heptenoic acid; ACS 67
13,14-dihydro-19(R)-hydroxy Prostaglandin E1 (50 ug)9-oxo-11。alpha。,15S,19R-trihydroxy-prostan-1-oic acid; 19(R)-hydroxy PGE0|13,14-dihydro-19(R)-hydroxy PGE1; 13,14-dihydro-19(R)-hydroxy Prostaglandin E1