1M 醋/乙酸鋰溶液 酵母
英文名:1M Lithium Acetate solution
描述:齊岳出品的酵母轉化試劑盒主要用于釀酒酵母質粒轉化實驗,該試劑盒遵循廣大用戶的使用習慣,分別提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液,PEG、LiAc均經過濾,Carrier DNA經優化處理,更有助于質粒DNA的轉化效率。該試劑盒可根據實際需要靈活配制1 × LiAc溶液和轉化預混液,既方便使用,又經濟實惠。
感受態細胞制備:
1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養基平板上劃線,30 ℃培養2-4天。
2.挑取酵母單菌落在YPDA培養基平板上劃3-5 mm的短線,30 ℃培養2-4天。
3.待酵母單菌落長至直徑2 mm時,把酵母細胞接種到3 mL YPDA液體培養基中,30 ℃過夜培養。
4.天轉接到含有30-50 mL YPDA液體培養基的三角瓶中繼續培養,待OD6000.4-0.5,3000 rpm離心5 min,棄上清。
5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min,棄上清。
6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc(150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水)重懸后轉移至1.5 mL離心管中,3000 rpm離心5 min,棄上清。
注意:10 × LiAc Solution經過pH緩沖,添加TE作為緩沖劑。
7.加入1 mL 1 × LiAc重懸,小體積轉化按照每管100 μL分裝,用于文庫轉化不分裝。
8.3000 rpm離心5 min,棄上清,感受態細胞即制備完畢。
注意:制備好的感受態立即使用,在8步離心前,室溫放置不應過5小時。
供應產品列表:
DO Supplement -His/-Met/-Ura |
DO Supplement -His/-Trp |
DO Supplement -Leu |
DO Supplement -Leu/-Ile/-Val |
DO Supplement -Leu/-Lys/-Trp |
DO Supplement -Leu/-Met |
DO Supplement -Leu/-Met/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Leu/-Met/-Ura |
DO Supplement -Leu/-Ura |
DO Supplement -Met |
DO Supplement -Met/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Met/-Ura |
DO Supplement -Ura |
DO Supplement-Ade-His-Leu-Trp |
DO Supplement -His/-Leu |
DO Supplement-His/-Leu/-Met/-Trp |
DO Supplement -His/-Leu/-Trp |
DO Supplement-His/-Leu/-Trp/-Ura |
DO Supplement-His/-Leu/-Ura |
DO Supplement-His/-Trp/-Ura |
DO Supplement -His/-Ura |
DO Supplement-Leu/-Met/-Trp |
DO Supplement -Leu/-Trp |
DO Supplement-Leu/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Met/-Trp |
DO Supplement -Trp |
DO Supplement -Trp/-Ura |
Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder |
Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder |
酵母單雜交早是1993年由Li等從酵母雙雜交發展而來,通過對報告基因的表型檢測,分析DNA與蛋白之間的相互作用,以研究真核細胞內的基因表達調控。由于酵母單雜交方法檢測某些轉錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和性,現已被用于克隆細胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的某些轉錄因子。
酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據DNA結合蛋白(即轉錄因子)與DNA順式作用元件結合調控報告基因表達的原理,克隆與靶元件結合的轉錄因子基因(cDNA)的方法。其理論基礎是:許多真核生物的轉錄子由物理和功能上的DNA結合區(DNA-binding domain BD)和轉錄區(Activation domain AD)組成,因此可構建基因與AD的融合表達載體,在酵母中表達為融合蛋白時,根據報道基因的表達情況,便能篩選出與靶元件有結合區域的蛋白。理論上,在單雜交檢測中,靶元件都可被用于篩選一種與之有結合區域的蛋白。
雙雜交系統的建立得力于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄因子的參與。80年代的工作表明, 轉錄因子在結構上是組件式的(modular), 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互的結構域構成,其中有DNA結合結構域(DNA binding domain,簡稱為BD)和轉錄結構域(activation domain,簡稱為AD),它們是轉錄因子發揮功能所的。單獨的BD雖然能和啟動子結合,但是不能轉錄。而不同轉錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并轉錄。
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