EZ Trans慢病毒包裝試劑盒

產品描述

和元李記EZ Trans慢病毒包裝試劑盒（EZ Trans Lentiviral Packaging Kit）包含:慢病毒包裝質粒、對照質粒、轉染試劑（EZ Trans Regent）等三個組份。和元李記慢病毒包裝試劑盒，提供足量、優質的對照質粒和包裝質粒，省去實驗人員抽提質粒的工作。

和元李記慢病毒載體表達系統由pLenti慢病毒載體和Lentiviral Mix質粒組成。pLenti慢載體中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他輔助元件，表達框為U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro，含綠色熒光和puro真核抗性。客戶可以根據不同的實驗目的針對plenti載體改造用于啟動子、基因功能功能研究，穩定株篩選等。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需原件，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統。

訂購信息

產品組分

運輸與保存

藍冰運輸。A、B組分-20℃保存，C組分4℃保存，有效期12個月。

使用方法

以10 cm培養皿為例（1皿為1T）

1.        細胞準備：293T細胞按照6×10⁵cells/mL的細胞密度傳代到10cm培養皿中，第二天細胞長到80%-85%時準備轉染。

2.        轉染前換液：轉染前1h將需要轉染的細胞更換新鮮的DMEM，10mL/皿。

3.        轉染：

1)        取1.5mL EP管記為質粒混合液(管A)，加入500uL DMEM，16μg質粒DNA（可自行改造）和22μg包裝質粒，振蕩混勻；

2)        另取1.5mL EP管記為轉染試劑混合液（管B），加入500uL DMEM，90μL 轉染試劑，振蕩混勻。

3)        再將管B緩慢加入到管A中，輕輕混勻，靜置8min形成復合物，后將混合液均勻滴加到提前換好液的10cm培養皿中，輕輕混勻，放入培養箱中培養

4.        轉染后換液：轉染后6-8h,將培養皿中的培養基吸掉，棄于廢液杯中，然后加入10mL 培養基（含有血清和抗生素）繼續培養。

5.        病毒收集：轉染48h后，吸取上清液于50mL 離心管中，4000rpm離心10min, 4℃，將上清液用0.45um過濾器過濾轉移到新的50mL 離心管中。此時上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可進行后續操作。

6.        病毒濃縮（可選）：每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒濃縮液（CAT:AC04L442），混勻，4℃放置2h，4000rpm離心30min，吸棄上清。

7.        病毒分裝及保存（可選）：吸取EZ慢病毒凍存液（CAT:AC04L453）1mL重懸上述病毒濃縮沉淀，輕輕混勻后-80℃保存。病毒溶液可分裝保存，避免反復凍融。

注意事項

1.      本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.      所有慢病毒操作均應盡量在BSL2*生物安全柜中進行，并佩戴一次性醫*口罩和手套。

3.      病毒切忌反復凍融，凍融一次病毒滴度降低10%-20%左右。

4.      病毒儲存6個月后，建議在使用前重新測定病毒滴度。

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