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產品描述
GelRed初由美國Biotium公司研發,是一種結合于所有dsDNA雙螺旋小溝區域的具有*設計的熒光染料,熒光信號強度與雙鏈DNA的數量相關,與溴化乙錠(EB)有相同的光譜特性,使用觀察EB的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,染色后的DNA條帶在紫外光透射下呈現紅色熒光。這種新型染料具有不能穿透細胞膜、與雙鏈DNA的結合力非常強,基因誘變性低,熱穩定性高,對分子生物學中常用的酶沒有抑制作用及適用范圍廣等優點,得到了市場的廣泛認可。該產品適用于瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳中的dsDNA、ssDNA及RNA染色。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
GelRed 核酸染料(10,000 × in DMSO) | AN34L011 | 500 μL | 550 |
保存方法
常溫運輸、保存,保質期24個月。
使用方法
1.膠染法(使用方法同EB,電泳前膠染色)
(1)制膠時按1:10000比例加入GelRed核酸染料(例如:每50 mL瓊脂糖溶液中加入5 μL GelRed 10,000×儲液)。由于GelRed具有良好的熱穩定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。此方法不適合預制聚丙烯酰胺凝膠。
(2)按照常規方法進行電泳。
2.泡染法(電泳后膠染色)
(1)按照常規方法進行電泳后,將凝膠小心地放入合適的容器中,緩慢加入足量的3×染色液(用0.1 M NaCl 溶液稀釋GelRed染液3300倍形成3×染色液,如將15 μL GelRed 10,000×儲液加入到50 mL 0.1 M NaCl 溶液,該染色液可重復使用3次,4℃(室溫)避光保存一周)浸沒凝膠。
(2)室溫振蕩染色30 min左右,輕輕搖晃,合適的染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介于30 min到1 h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。
3.預染法(省染料的染色方法,電泳前待測樣品染色)
(1)該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。
(2)工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的GelRed原液稀釋1000倍,即為10×GelRed工作液。GelRed工作液可以置2~8℃冷藏一個月以上。
(3)制膠:按常規方法制膠,不含任何染料。
(4)待測樣品染色:向分析樣品中加入GelRed工作液和載樣緩沖液,使GelRed工作液的終濃度為1×,室溫放置10分鐘,使GelRed與樣品中DNA充分結合。
(5)DNA Marker染色:將5 μL DNA Marker和1 μL GelRed工作液混勻,室溫放置5 min,使GelRed與DNA充分結合。
(6)上樣、電泳:按常規操作。
注意事項
1. 在常規用酒精沉淀核酸的過程中,GelRed 可以全部從雙鏈核酸上去掉。
2. 如果想對用 GelRed 染過的膠進行 Southern blots,建議在預雜化和雜化溶液中加入 0.1%~0.3% 的SDS。
3. 為了避免染料對核酸遷移的影響,推薦使用泡染法進行染色。
4. GelRed對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
5. GelRed原液在室溫保存,如放置冰箱保存會產生部分沉淀,使用前適當加熱并搖勻即可正常使用。
6. 如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關,請嘗試:降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時間以保證邊緣清晰、改進上樣技巧或選擇泡染法染色。
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EZ Mark非預染DNA ladder(貨號:AN33L077)