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AP01L013/AP01L014-RIPA(強)細胞裂解液(帶抑制劑)
  • AP01L013/AP01L014-RIPA(強)細胞裂解液(帶抑制劑)
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貨物所在地:上海上海市

地: 上海

更新時間:2024-06-07 17:04:59

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RIPA(強)細胞裂解液(帶抑制劑),通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質,是一種經典的動物組織/細胞快速裂解液。
RIPA(強)細胞裂解液(帶抑制劑)

產品描述
  RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液,通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質,是一種經典的動物組織/細胞快速裂解液。對細胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,適用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。RIPA裂解液的配方有很多種,根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。可以根據后續實驗的需要選擇,具體選擇標準見下表1。
訂購信息

產品名稱

貨號

規格

價格

RIPA(強)細胞裂解液(帶抑制劑)

AP01L013

50 mL

148

RIPA(強)細胞裂解液(帶抑制劑)

AP01L014

100 mL

218

產品組分

產品編號產品組成包裝規格
AP01L013RIPA(強)細胞裂解液50 mL
PMSF 溶液(100 mM)1 mL
磷酸酶抑制劑II cocktail(50×)1 mL
產品說明書一份
AP01L014RIPA(強)細胞裂解液100 mL
PMSF 溶液(100 mM)1 mL
磷酸酶抑制劑II cocktail(50×)2*1 mL
產品說明書一份

保存方法
  裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質期一年。
使用方法
1. 對于培養細胞樣品

(1) 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF (CAT:AP02L014),使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細胞裂解

對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2 s后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混勻,充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,需分裝成50~100萬細胞/管,然后再裂解。具體RIPA裂解液的使用量參照表2。

(3) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2. 對于組織樣品

(1) 把組織剪切成細小的碎片;
(2) 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM;
(3) 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量,具體RIPA裂解液的使用量參照表2。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
(5) 充分裂解后,10000~14000rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項

(1) RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaBp53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。
(2) RIPA(強)裂解液含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定蛋白。
(3) 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
(4) 通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
表1: 不同RIPA裂解液的選擇標準
產品應用RIPA裂解液(強)RIPA裂解液(中)RIPA裂解液(弱)
裂解強度溫和
膜蛋白的提取很好較好一般
胞漿蛋白的提取很好很好很好
核蛋白的提取很好較好較好
胞漿磷酸化蛋白提取很好很好很好
細胞核轉錄因子提取很好很好很好
主要用途WB, IPWB, IPWB, IP, co-IP

表2: RIPA裂解液的使用量

樣品來源培養容器收獲細胞數RIPA用量可制備樣品數
細胞6孔板2.5 x 106150-250 μL400~600
60 mm培養板5.2 x 106300-500 μL200~300
90 mm培養板12.2 x 106500-1000 μL100~200
25 cm2培養瓶5 x 106300-500 μL200~300
75 cm2培養瓶2 x 1071000-2000 μL50~100
組織20 mg組織塊2.5 x 106150-250 μL400~600

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