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上海萊睿科學儀器有限公司
主營產品： 安捷倫液相色譜儀,氣相色譜儀,尼高力紅外光譜儀,IKA磁力攪拌器,TOMY高壓滅菌鍋 |
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2016-1-22 閱讀(1877)
1 實驗部分
1.1 試劑
無水硫酸鈉﹑弗羅里硅土﹑正己烷（分析純），購置國藥集團。碳氫化合物標準品信息見表1。
1.2 儀器
攪拌機﹑離心機﹑水浴鍋﹑玻璃層析柱（20～30cm長，內徑20mm）﹑100mL 雞心瓶﹑旋轉蒸發(fā)儀。Aglient7890B氣相色譜儀（FID 檢測器/Aglient19091J- 413 HP- 5 毛細柱30.0m×320μm×0.25μm）。
1.3 供試材料
雞肉﹑木瓜﹑芒果, 由市場購置。
1.4 前處理方法
1.4.1 雞肉樣品的前處理
1）脂肪的提取：初步剁碎雞肉樣品，并用攪拌機均質，50℃水浴中加熱。該過程中加入少量水以促進相分離。加熱時，用玻棒不時的攪拌至油相*呈溶液狀態(tài)。將加熱后的均質混合物于4000r/min轉速下離心4min，然后用吸管吸取上層油相。
2）凈化：將去活的弗羅里硅土裝入層析柱中，將加入的脂肪溶液定量過層析柱，用60mL 正己烷將HC 洗脫。雞心瓶接得的洗脫液用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至3mL，水浴溫度為40℃。將濃縮的洗脫液轉移入刻度試管。氮氣吹至約1mL，轉移0.9mL 于GC 瓶中，同時加入0.1mL0.1mg/mL 正二十烷內標溶液。
1.4.2 木瓜與芒果樣品的前處理
1）脂肪的提取：將木瓜（芒果）去皮，取果肉，將果肉與無水硫酸鈉按1：1 比例混合，均質。將此均質混合物放入燒杯中，加入100mL 正己烷，攪拌2min。轉移正己烷與樣品的混合物至離心管中。4000r/min 轉速下離心5min，以傾析法將提取溶液小心轉移入圓底燒瓶中。對剩余物用50mL 正己烷再次提取，提取液合并于上述圓底燒瓶中，用旋轉蒸發(fā)儀于45℃，將提取液濃縮至2~3mL。
2）凈化：將去活的弗羅里硅土裝入層析柱中，將濃縮的提取液定量過層析柱，用60mL 正己烷將HC 洗脫。雞心瓶接得的洗脫液用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至3mL，水浴溫度為40℃。將濃縮的洗脫液轉移入刻度試管。氮氣吹至約1mL，轉移0.9mL 于GC 瓶中，同時加入0.1mL0.1mg/mL 正二十烷內標溶液。
1.5 氣相色譜檢測條件
1）進樣模式：不分流；
2）進樣體積：1μL；
3）H2:Air=40:450；
4）進樣溫度：200℃；
5）檢測器溫度：280℃；
6）爐溫升溫程序：
起始柱溫：40℃，恒溫1min；
*級程序升溫：25℃/min 至80℃；
第二級程序升溫：2.5℃/min 至170℃；
第三級程序升溫：10℃/min 至280℃，zui終溫度保持5min。
1.6 結果計算
在輻照過程中，某些化學鍵會在一級和二級反應中斷裂。甘油三酸酯的脂肪酸部分主要在羰基的α 位和β 位發(fā)生化學鍵斷裂，從而得到相應的Cn- 1（比原脂肪酸少一個碳的烷烴）以及Cn- 2:1（比原脂肪酸少2 個碳的烯烴）的碳氫化合物（HC）。在檢測時，為了預測主要的輻照產物，樣品中脂肪酸的構成必須是已知的。為了檢測HC，樣品中的脂肪需通過溶出或者溶劑萃取的方法分離出來。HC 通過層析柱保留，經氣相色譜分離后用火焰離子化檢測器（FID）或者質譜（MS）檢測。
以內標進行校正，用下述方程式（1）計算每種碳氫化合物的濃度CHC：
表2 和表3 中羅列了幾種常見肉品和水果中的脂肪酸及輻照衍生碳氫化合物，供檢測定性參照。
2 結果與分析
2.1 相關標準品的氣相色譜檢測結果
將購買到的標準品和內標配制成4μg/mL 的混合標準溶液，在設好的色譜條件下，進行分離。
根據混標計算各標準品相對于內標的響應因子Fi：（Fi=Ci*A 內標/C 內標*Ai），結果見表4。
2.2 雞肉樣品色譜檢測結果
實驗中采用1kGy 和5kGy Co60 輻照的雞肉樣品作為陽性樣品，未經輻照的空白雞肉樣品作為陰性對照，采用上述色譜條件，對提取后的脂肪部分進行檢測，結果如圖2 所示。從下述3 張譜圖的比較可知，經1kGy 和5kGy 劑量處理的雞肉樣品中由輻照產生的Cn- 1 和Cn- 2:1 明顯檢出。
以內標進行校正，用方程式（1）計算每種碳氫化合物的濃度CHC，單位為μg/mL，結果見表5 和表6。從1kGy 和5kGy 的輻照處理樣品的結果可以看出典型的輻照衍生物在兩種劑量處理過程中均有出現(xiàn)，且隨著劑量的增加其在脂肪中的含量也逐漸增加，以上述衍生物的檢出指示雞肉樣品是否經過輻照是可行的。
2.3 木瓜樣品色譜檢測結果
實驗中采用1kGy 和5kGy Co60 輻照的木瓜樣品作為陽性樣品，未經輻照的空白木瓜樣品作為陰性對照，采用上述色譜條件，對提取后的脂肪部分進行檢測，結果如圖3 所示。從下述3 張譜圖的比較可知，經1kGy 和5kGy 劑量處理的木瓜樣品中由輻照產生的Cn- 1 和Cn- 2:1 明顯檢出。
按照公式（1）計算得出輻照衍生物的含量，結果見表7 和表8。從1kGy 和5kGy 的輻照處理樣品的結果可以看出典型的輻照衍生物在兩種劑量處理過程中均有出現(xiàn)，且隨著劑量的增加其在脂肪中的含量也逐漸增加，而且與雞肉樣品相比，由于木瓜中油酸含量占脂肪的60~80% ， 棕櫚酸為15~20%，所以在輻照衍生物中1，7- 十六烷二烯的含量明顯大于1- 十四烯和正十五烷，綜上所述，以上述衍生物的檢出指示木瓜樣品是否經過輻照是可行的。
2.4 芒果樣品的色譜檢測結果
實驗中采用1kGy 和5kGy Co60 輻照的芒果樣品作為陽性樣品，未經輻照的空白芒果樣品作為陰性對照，采用上述色譜條件，對提取后的脂肪部分進行檢測，結果見圖4, 從下述3 張譜圖的比較可知，經1kGy 和5kGy 劑量處理的木瓜樣品中由輻照產生的Cn- 1 和Cn- 2:1 明顯檢出。
按照公式（1）計算得出輻照衍生物的含量，結果見表9 和表10。從1kGy 和5kGy 的輻照處理樣品的結果可以看出典型的輻照衍生物在兩種劑量處理過程中均有出現(xiàn)，且隨著劑量的增加其在脂肪中的含量也逐漸增加，以上述衍生物的檢出指示芒果樣品是否經過輻照是可行的。
3 小結與討論
含脂食品經過γ 輻射會產生碳氫化合物，本研究通過檢測這些特定的碳氫化合物，從而確定含脂食品是否經過輻照。通過弗羅里層析柱和氣相色譜分離碳氫化合物，再用火焰離子化檢測器（FID）進行檢測。在1kGy 和5kGy 兩種劑量的Co60 輻照下，待檢樣品中被明顯檢出含1- 14:1、15:0、1，7- 16: 2、1- 16:1、17:0 等碳氫化合物中的幾種，而這些碳氫化合物在未經輻照的樣品中均未被檢出。對雞肉、木瓜、芒果四種含脂樣品的檢驗結果表明，本方法*含脂輻照食品的鑒定分析要求。但由于特征碳氫化合物的產生并非隨輻照劑量的增加而線性增加，因此該法還不能用于定量分析以確定含脂輻照食品的輻照劑量。
