您好, 歡迎來到化工儀器網
5
Pala, 助力單B細胞分離及聯合測序
單細胞RNA測序（scRNA-seq）作為一種高通量測序技術，它允許研究者在單個細胞水平上測量基因表達，揭示細胞群體內部的異質性，識別不同細胞類型或狀態的基因表達模式，為細胞生物學、發育生物學、疾病研究和藥物發現等領域的研究提供了新的維度和深度。
單細胞RNA測序技術起始于單細胞分離，Bio-Techne單細胞柔性系統Pala為單細胞分選提供了快速便捷的途徑。以下實驗通過單細胞柔性分選系統Pala分選經細胞活性染料及特異性熒光抗體標記的單個活化B細胞。通過對靜息及活化B細胞基因表達分析研究活化對基因表達的影響。
實驗步驟
（1）利用mCD40L-3T3飼養細胞對人原代記憶B細胞活化6天。收集活化后細胞并用抗人CD27-PE抗體及細胞活性染料CellTrackerGreen進行染色。
（2）在板中加入每孔4微升裂解液，利用單細胞柔性分選系統Pala將PE及FITC陽性細胞分選至96孔PCR板中。細胞裂解后進行cDNA合成及RNA建庫測序。
（3）每孔中進行VH及VL抗體可變區基因特異性擴增（qPCR）。
（4）基因文庫利用Illumina Nextseq進行測序，比較活化及靜息狀態下B細胞的基因表達差異。
實驗結果
（1）單細胞分離效率：經過擴增后，96孔中有93孔含有cDNA（97%）。
（2）單細胞驗證：Sanger測序表明所有的孔中都是單個細胞，不存在二聚體的情況。
（3）免疫球蛋白基因表達：免疫球蛋白qPCR結果顯示所有所有樣品中均表達重鏈IGVH，輕鏈僅表達kappa或lambda（IGVK、IGVL）中的一種。
（4）B細胞活化相關基因表達變化：觀察到多個與B細胞活化相關的基因表達發生變化。這些基因包括但不限于CD22、CD19、BLNK、PLCγ2、IRF4、BLIMP1、XBP1、CD27、CD38和CD319。
（5）免疫球蛋白亞型表達：展示了IgG、IgA以及kappa和lambda輕鏈的表達情況，這有助于了解B細胞在活化狀態下的免疫球蛋白亞型轉換。
Bio-Techne單細胞柔性分選系統Pala為單細胞分離和分選提供了一個輕柔、快速、易于操作平臺，可與下游的單細胞基因組分析聯合使用。
* 本文轉載自「ProteinSimple」微信公眾號
> >關于ProteinSimple：
美國納斯達克上市公司Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集團旗下的蛋白質分析品牌，一直致力于研發和生產更精準、更快速、更靈敏的創新性蛋白質分析工具，包括蛋白質電荷表征、蛋白質純度分析、蛋白質翻譯后修飾定量檢測、蛋白質免疫實驗如 Western 和 ELISA 定量檢測蛋白質表達等技術，幫助生物制藥、細胞治療、生物醫學和生命科學等領域科學家解決蛋白質分析問題，深度解析蛋白質和疾病相互關系。
>> 關于上海昊擴：
上海昊擴科學器材有限公司成立于2019年，總部位于上海，是一家實驗室設備/耗材及分析儀器的專業服務商。公司致力于為生物、醫藥、物性檢測、化工分析、食品、工業生產等相關領域客戶提供國內外高科技專業設備以及技術咨詢服務。2024年，上海昊擴正式與美國Bio-techne集團旗下的蛋白質分析品牌ProteinSimple達成合作，成為其華東大區授權代理商。
