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詳細(xì)介紹
QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for E. coli
QCdetect™ 殘留DNA檢測試劑盒，大腸桿菌用
本產(chǎn)品是使用qPCR法（探針法）定量大腸桿菌來源基因組DNA的試劑盒。
推薦用于生物制藥的質(zhì)量管理以及生產(chǎn)工藝開發(fā)中的宿主細(xì)胞來源殘留DNA檢測。
◆特點
● 檢測下限：≥0.003 pg/test
● 定量下限：≥0.03 pg/test
● 高線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線
● 批次間差異小，再現(xiàn)性高
● 使用預(yù)混合緩沖液，操作簡單
◆檢測波長
● E. coli gDNA 520 nm（例：FAM）
● Internal Control 555 nm（例：HEX）
※Internal Control為非天然的合成DNA。
◆試劑盒組成
1×PCR Master Mix——2×1 mL
DNA Dilution Buffer (DDB) ——1×10 mL
E. coli Control DNA——1×40 μL
◆應(yīng)用實例
標(biāo)準(zhǔn)曲線
使用本試劑盒對0.0003 pg~30,000 pg范圍內(nèi)的大腸桿菌來源gDNA進(jìn)行qPCR檢測，并制備標(biāo)準(zhǔn)曲線（n=3）。
即使是0.003 pg~30,000 pg這一大范圍的濃度內(nèi)，也能獲得高線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 |
pg/well | 30000 | 3000 | 300 | 30 | 3 | 0.3 | 0.03 | 0.003 | 0.0003 |
Ct | 15.655 | 19.011 | 22.335 | 25.709 | 28.932 | 31.941 | 33.825 | 37.731 | N.D |
15.393 | 18.976 | 22.414 | 25.675 | 28.875 | 31.684 | 34.866 | 38.012 | ||
15.713 | 19.091 | 22.400 | 25.696 | 28.945 | 31.657 | 34.507 | N.D | ||
Average Ct | 15.587 | 19.026 | 22.383 | 25.693 | 28.917 | 31.760 | 34.399 | 37.872 | |
S.E | 0.1707 | 0.0593 | 0.0418 | 0.017 | 0.0371 | 0.1566 | 0.5292 | 0.1989 |
DNA片段的檢測
為了測試該產(chǎn)品能否檢測大腸桿菌gDNA，通過超聲處理使大腸桿菌 gDNA片段化，并使用本試劑盒進(jìn)行檢測。
即使是檢測片段gDNA，與檢測完整gDNA相比，也有著相同的檢測靈敏度。低濃度的gDNA中也沒有發(fā)現(xiàn)靈敏度的下降。 |
高濃度蛋白樣品的應(yīng)用示例 —配合使用殘留DNA提取/試劑盒（碘/化鈉法） —
向含有人血漿來源γ-球蛋白（75 mg/mL）的樣品中分別添加0.1、1、10 ng/mL的大腸桿菌gDNA，使用殘留DNA提取/試劑盒（碘/化鈉法）提取DNA。然后，使用本產(chǎn)品定量所得DNA，計算加標(biāo)回收率。
DNA添加量 | 0.1 ng/mL | 1 ng/mL | 10 ng/mL |
檢測系統(tǒng)（PCR反應(yīng)）中的DNA添加量 | 1 pg | 10 pg | 100 pg |
回收率（平均） | 96.9% | 85.7% | 86.9% |
SD | 0.013 | 0.67 | 1.4 |
CV% | 1.3% | 7.8% | 1.6% |
Detection of E. coli-derived genomic DNA | Detecting Internal Control |
|
|
結(jié)果顯示，即使是含有高濃度蛋白的樣品，大腸桿菌gDNA也有著高回收率。 |
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
290-85301 | QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for E. coli QCdetect™ 殘留DNA檢測試劑盒，大腸桿菌用 | 100 tests |
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
294-85201 | QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for CHO cells QCdetect™ 殘留DNA檢測試劑盒，CHO細(xì)胞用 | 100 tests |
殘留DNA提取/試劑盒（碘/化鈉法）
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
292-81101 | DNA Extractor® Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method) 殘留DNA提取/試劑盒（碘/化鈉法） | 50 tests |
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