ES細胞?iPS細胞培養(yǎng)用血清代替品
本產(chǎn)品是ES細胞和iPS細胞培養(yǎng)中使用的血清代替品。血清含有分化誘導因子，會導致干細胞分化。使用本產(chǎn)品代替血清，可在ES和iPS細胞培養(yǎng)的同時，保持他們的未分化狀態(tài)，達到穩(wěn)定培養(yǎng)。
本產(chǎn)品不含劇毒物質(zhì)，將其作為普通物質(zhì)處理。
使用本產(chǎn)品配制培養(yǎng)基培養(yǎng)的小鼠ES細胞，可用于制備嵌合體小鼠，并確認其種系傳遞。

ES細胞?iPS細胞培養(yǎng)用血清代替品

 

　　本產(chǎn)品是ES細胞和iPS細胞培養(yǎng)中使用的血清代替品。血清含有分化誘導因子，會導致干細胞分化。使用本產(chǎn)品代替血清，可在ES和iPS細胞培養(yǎng)的同時，保持他們的未分化狀態(tài)，達到穩(wěn)定培養(yǎng)。
　　本產(chǎn)品不含劇毒物質(zhì)，將其作為普通物質(zhì)處理。
　　使用本產(chǎn)品配制培養(yǎng)基培養(yǎng)的小鼠ES細胞，可用于制備嵌合體小鼠，并確認其種系傳遞。

 

◆特點•優(yōu)勢

●　可用于嵌合體小鼠制備，并確認其種系傳遞。

●　作為血清替代品，用于小鼠ES細胞?人IPS細胞培養(yǎng)。

●　不含劇毒物質(zhì)。

 

◆案例•應用

1、嵌合體小鼠的制備與種系傳遞

　　將組裝HaloTag^® cDNA的目標載體導入小鼠ES細胞，用含有StemSure^® Serum Replacement（SSR）的培養(yǎng)基培養(yǎng)。確認載體導入小鼠ES細胞后，將其注入至ICR小鼠的胚盤胞，并移植至ICR小鼠的子宮。得到的嵌合體小鼠與C57BL/6J小鼠交配，獲得F1小鼠。

 

(1) 　嵌合體小鼠

　　收集嵌合體小鼠的血液，用TRITC（四甲基若丹明異硫氰酸鹽）對HaloTag^® 蛋白質(zhì)染色。發(fā)現(xiàn)小鼠ES細胞源的HaloTag^® 的血液被染色，可確認為嵌合化。

　　　　

      

 

(2)　F1小鼠

　　F1小鼠的血液發(fā)現(xiàn)HaloTag^® 存在，可確認用SSR培養(yǎng)基培養(yǎng)的ES細胞嵌合小鼠能夠正常存活。

 

 

2、人iPS細胞201B7的培養(yǎng)

(1)　克隆形態(tài)與ALP染色 

　　已確認可用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培養(yǎng)人iPS細胞201B7株。ALP染色呈陽性。

<培養(yǎng)基組成>
D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5 ng/mL bFGF

 

(2)　未分化標記的發(fā)現(xiàn)

　　使用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培養(yǎng)的人iPS細胞201B7株，確認各種未分化標記（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈陽性。

 

3、小鼠ES細胞D3的培養(yǎng)

(1)　細胞形態(tài)與ALP染色

　　使用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培養(yǎng)小鼠ES細胞D3，能觀察到小鼠ES細胞群*的光澤，ALP染色呈陽性。

 

 

(2)　細胞增殖曲線

　　用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠ES細胞D3進行14繼代培養(yǎng)，比較細胞增殖。

　　如下圖所示StemSure^® 系列與A公司有同等的性能。

< StemSure^® 系列培養(yǎng)基組成>
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

（使用膠原包被的12孔板）

 

(3)　細胞群倍加數(shù)*

　　使用不同培養(yǎng)基對小鼠ES細胞D3進行繼代培養(yǎng)，檢查培養(yǎng)天數(shù)與細胞群倍加數(shù)的關系。

　　下圖顯示StemSure^® 系列與A公司產(chǎn)品的細胞群倍加數(shù)相同。

　　*細胞群倍加數(shù) cell population doubling level，縮寫PDL，指從培養(yǎng)開始至現(xiàn)在細胞群的倍增次數(shù)。

 

<培養(yǎng)基組成>

StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/ml StemSure^® LIF

（使用膠原包被的12孔板）

 

(4)　未分化標記的檢測

　　使用StemSure^® 系列對小鼠ES細胞D3進行5代繼代培養(yǎng)，各種未分化標記（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈陽性。

<培養(yǎng)基組成>
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

 

4、畸形瘤的形成

　　用StemSure^® 系列對小鼠ES細胞D3進行繼代培養(yǎng)。對免疫不全小鼠的皮下注射培養(yǎng)后細胞。在形成皮下畸形瘤，其內(nèi)部檢測出神經(jīng)組織（外胚葉源）、軟骨組織（中胚葉源）、管腔結構纖毛上皮（內(nèi)胚葉源）。

<培養(yǎng)基組成 >
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

 

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
191-18375	Stemsure® 血清替代品	細胞培養(yǎng)用	500 mL

ES細胞?iPS細胞培養(yǎng)用血清代替品