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人白細胞介素1受體I 型 Human IL-1 sRI

人白細胞介素 1 可溶性受體 I 型 ELISA 試劑盒
產品編號：SEKH-0005
適用于人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本

背景介紹：
IL-1 家族受體包括 10 個成員，大部分受體胞外區含有 3 個類似免疫球蛋白 (IgG)的片段。IL -1RI、IL-1RII和 IL-1RIII 是可以與 IL1α及 IL-1β結合的受體，IL-l 是一種 T 淋巴細胞激活因子，主要產生于單核細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞等，是調節細胞免疫的主要致炎性細胞因子，誘導 T 和 B 細胞分化和增殖，亦誘導抗原特異性殺傷細胞和自然殺傷細胞的增殖，在慢性炎癥和自身免疫性疾病中發揮重要作用。人 IL-l RI 基因編碼 549 個氨基酸，其中胞外區 316 個氨基酸．單次跨膜區 20 個氨基酸和胞內區 213 個氨基酸，分子量為 80 kDa，含有 3 個免疫球蛋白樣結構域。IL-1RI，IL-1RII 及參與活性調節的 IL-lR 輔助蛋白，三者均為膜受體，共同參與和 IL-1 的結合及其信號轉導，IL-1RAcp 本身不與 IL-1 結合， 但在 IL-1 信號轉導通路中起關鍵作用。 

檢測原理：
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯免疫吸附檢測技術。將抗人 IL-1 RI 單克隆抗體包被在酶標板上；分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本，標準品和樣本中的人 IL-1 RI 會與酶標板上的包被抗體充分結合；洗板后加入生物素化抗人 IL-1 RI 抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的人 IL-1 RI 發生特異性結合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發生高強度的非共價結合；洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應孔中樣品存在不同濃度的人 IL-1 RI，則 HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺（正相關）的藍色物質，加入終止液后反應孔會變成黃色；后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應孔樣品吸光度（OD），樣本中的人 IL-1 RI 濃度與OD 成正比，通過繪制標準曲線和四參數擬合軟件便可計算出樣本中人 IL-1 RI 的濃度。

注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。. 6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結果準確，每次檢測均需做標準曲線。 

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關管理規定執行。

自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管

樣本收集及儲存：
1. 細胞培養上清：
將細胞培養基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的值，請將樣品做適當倍數稀釋后檢測，建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數。

 人白細胞介素1受體I 型 Human IL-1 sRI