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細胞培養試劑人或各種動物血液及骨髓干細胞分離液
規格:200ml
保存:18℃-25℃避光保存,有效期 2 年。
本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 與泛影酸葡甲胺。適用于從各種動物血液及骨髓中分離干細胞,在醫療和醫學生物學研究中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。注:因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。
一、分離方法說明及圖例
A.Ⅰ. 取新鮮抗凝血液或臍帶血與淀粉 550 按 1:1 比例混合, 37℃反應 5-10 分鐘(5ml 以下樣本反應 5 分鐘,5ml 以上樣本反應 10 分鐘) ;取新鮮抗凝骨髓,加入一份細胞洗滌液,混勻后以 400g(約 1500 轉/分)離心 5 分鐘,棄去上清。沉淀與淀粉 550 按 1:1 比例混合,37℃反應 5-10 分鐘(5ml 以下樣本反應 5 分鐘,5ml 以上樣本反 應 10 分鐘) ;
B. 加入為步驟 A 中所得混合液 1/2 體積的全血及組織稀釋液混勻 20℃-30℃自然沉降 20-30 分鐘,吸取上清 吸取上清備用;
C. 向步驟 B 中所得上清液中加入為其一倍以上體積的細胞洗滌液混勻,以 500g(約 1800 轉/分)離心15 分鐘(半徑 15cm 水平轉子) ,棄去上清保留沉淀細胞;
D. 向細胞沉淀中加入全血及組織稀釋液調整細胞濃度為 2×10 8 —1×10 9 個/ml,小心疊加于細胞分離液之液面上(混合液:分離液=2:1) ;
E. 以 400g(約 1500 轉/分)離心 20 分鐘(半徑 15cm 水平轉子) ;
此時離心管中由上下細胞分四層。*層;為稀釋液層。第二層;為環狀乳白色含所需干細胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為極少紅細胞層。收集第二層細胞放入為其5-10倍體積的細胞洗滌液中,充分混勻后,以500g(約1800 轉/分)離心15分鐘。沉淀經反復洗滌2 次即得所需干細胞。
F. 為獲得純度更高的干細胞,在步驟 E 中離心完成后可吸取第二層干細胞層再與淀粉 550按 1:1比例混勻,20℃-30℃自然沉降 20-30 分鐘,收集上清加入細胞洗滌液 500g(約 1800 轉/分)離心 15 分鐘。沉淀經反復洗滌 2 次既得較高純度干細胞。(用戶可根據實際需要重復此操作步驟)
注:本方法提取率大于 80%,所提細胞不分化不轉化,對人體無害,可用于生物治療、細胞培養及分子生物學實驗等。
分離圖例:
二、 注意事項
A. 本分離液是敏光型的, 在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存, 啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現白色結晶,影響分離效果。
B.待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
C.由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調節離心轉數,調節離心的時間,摸索的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
D.好使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
E.優抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。
F.分離過程中所用其他試劑如:淀粉550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及紅細胞裂解液等以我公司產品為優選擇,本公司相關系列產品無菌、無病毒、無支原體、低內毒素水平且無細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態。
三、產品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養14 天后培養基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下
四、貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周。
注:若保證無微生物污染,啟封后可置4℃長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易
出現白色結晶,影響分離效果。
細胞培養試劑人或各種動物血液及骨髓干細胞分離液訂購說明:
1、絕大部分產品備有現貨,一般情況下都能訂貨當日發貨。
2、部分非常用產品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
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運輸說明:
1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品:常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。