目錄:北京索萊寶科技有限公司>>分子生物學>>DNA電泳>> G7140DNA電泳試劑 DNAGREEN 核酸染料
貨號 ：G7140
規格：0.5ml (10000×)
保存：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。
注意 ：本產品屬于微量核酸檢測試劑，使用時請按照說明書操作。
產品簡介 ：
目前常見的替代 EB 的核酸染料 SYBR Green I （屬于花氰類染料） 雖然毒性比 EB 低、 靈敏度比 EB 高，但由于其化學穩定性差；此外，SYBR Green I 在電泳過程中能在 DNA 分子間移位，很容易使 DNA 條帶模糊和扭曲，電泳清晰度和分辨率下降。所以在實際應用中依然不能有效替代 EB。本產品是同時具有 EB 穩定性和 SYBR Green I 低毒性的新性核酸染料，其特點如下：
1. 低毒。其主要成分未發現對人體有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保護使用者的健康和保護日益惡化的環境。
2. 靈敏。檢測靈敏度跟 EB 相當，能滿足常規核酸電泳實驗要求。
3. 穩定。對光、水和熱的穩定性跟 EB 相當，可加入瓊脂糖凝膠中反復熔化。
4. 無分子間位移現象。不會出現 SYBR 染料常見的條帶模糊和扭曲現象。
5. 使用方法多樣。既可以加入熔化的膠中，也可以電泳后染色，還可用于 PAGE。
6. 跟各種常用的核酸電泳緩沖液（如 SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在 SuperBuffer-2 和 TBE 中背景低。
7. 觀察時不需要任何額外的儀器設備或 UV 光源，可以使用現成的觀察 EB 的 300nm UV。
8. 可用于 RNA 染色(也呈綠色)。
9. DNA 或 RNA 濃度較高時還可以直接在日光下觀察 （需要將膠放在黑色背景下） 。 由于避免了 UV 對 DNA的傷害，尤其適用于膠回收實驗。
使用方法:
電泳中染色：
本方法是將 DNAGREEN 直接加入溶化的凝膠中使用，只適用于瓊脂糖凝膠電泳，不適用于 PAGE。
1. 將 DNAGREEN 直接加入到融化的瓊脂糖凝膠中， 每 100mL 凝膠加 310 uL DNAGREEN， 混合均勻后倒膠。瓊脂糖凝膠中不能含任何其他染料（如 EB 和 SYBR Green I，否則會相互干擾） 。在 100mL 瓊脂糖凝膠中加入 DNAGREEN 的量不要超過 10 uL，否則背景增強。注意：一定要保證瓊脂糖*熔化，尤其是在*次熔化膠的時候，否則未熔化的小顆粒將產生跟染料相同的熒光。
2. 將 DNA 樣品與 DNA 上樣液按比例混合后上樣。注意：一定要使用不含 SDS 等去污劑的上樣液，否則SDS 會跟染料結合，極大地降低靈敏度。
3. 上樣后電泳，電泳參數同常規的電泳。
4. 電泳結束后在 300 nm 左右 的 UV 下觀察。
注意：不要使用波長為 260 nm 或 360 nm 的 UV，否則檢測靈敏度會降低。如果 DNA 或 RNA 濃度較高，還可以直接在日光下直接觀察（需要將膠放在黑色背景下） ，
避免 UV 對 DNA 的傷害，尤其適用于膠回收實驗。
5. 用配置了 520-550 nm 濾光片（一般呈黃色或深黃色）的相機拍照。注意：不要使用與 EB 兼容的紅色濾光片（它能阻擋 520-550 nm 的光） 。如果能再加上能濾去 UV 的濾光片，效果會更好。
6. 后續 Southern、轉膜或 DNA 膠回收實驗按常規操作進行。
電泳后染色：
本方法是在電泳后對 DNA 進行染色，適用于瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE。但該方法需要單獨的染色處理，染料用量較大，不推薦用于瓊脂糖凝膠的染色。
1. 按照常規方法進行電泳。
2. 用去離子水將 DNAGREEN 稀釋 500 倍后（100 mL 水需要加 0.2 mL DNAGREEN） ，將凝膠放入，室溫下搖晃染色 30 分鐘（對瓊脂糖凝膠）或 15 分鐘（對 PAGE） 。
3. 用水脫色 10-30 分鐘，具體時間需根據背景強弱決定。
注意：電泳后染色液可以反復使用次數。
疑難解答:
Q：本產品可否用于 RNA 染色？
A： 可以，不論 RNA 是在甲醛變性膠中電泳，還是在普通的 SuperBuffer-2、TBE 或 TAE 膠中電泳，RNA染色后在 300nm 下都跟 DNA 一樣呈綠色，
Q：本產品是否可以加入上樣液中進行染色？
A：不行，本產品只能直接加入凝膠中進行染色或電泳后再染色。
Q：為何前端（靠近正極）的 DNA 條帶很淡或根本看不見？
A：跟 EB 一樣，電泳時 DNAGREEN 朝負極方向移動，當前端的 DNA（小片段）進入沒有 DNAGREEN的區域時，已經結合的染料分子會逐漸從 DNA 分子上脫落，所以條帶會變淡或根本看不見。解決辦法之一是縮短電泳時間或電泳后再染色；之二是在每 100 mL 電泳緩沖液中補加 3-5uL 染料。
Q：本產品在哪種緩沖液中效果好？
A：DNAGREEN 染料在不同緩沖液中背景熒光強度不同，從弱到強的順序是：SuperBuffer-2、TBE、TAE。
在背景較強的緩沖液體中，可以適當降低染料的用量，比如 100mL 膠中加 3-5 uL。濃度需要稍做摸索。
Q：用 SYBR 染色的 DNA 在電泳時為何容易發生條帶模糊和扭曲現象？
A：SYBR 染料一般與 DNA 的小溝結合，但在常規電泳條件下該結合并不牢固，染料分子可以在標記的和未
標記的 DNA 分子之間轉移，使 DNA 分子的泳動速度時快（無染料結合時）時慢（有染料結合時） ，發生條帶模糊和扭曲現象。嵌入型染料（如 EB 和本產品）與 DNA 結合牢固，則無此現象。
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DNA電泳試劑 DNAGREEN 核酸染料運輸說明：
1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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