線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
                                                                                              分光光度法

產品名稱:：  線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒

產品英文名: Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

產品貨號：BC0510            產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣             產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：2200
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：：   ：  ：  線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ檢測試劑盒|  線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ|線粒體呼吸鏈|試劑盒

簡要介紹：
復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、 微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體內膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從 NADH 傳遞給 CoQ，同時可使O2還原生成 O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產生O2.-的主要部位。 測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態，而且可以反映活性氧（ROS） 生成狀態。

產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體25 mL×1瓶，4℃保存；  
試劑一：液體25 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入2mL丙tong
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙tong，可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用，現用現配。
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入2mL蒸餾水，現配現用；   
工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三1:1混合，現配現用。
產品說明：
復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體內膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ，同時可使O₂還原生成O^2-，是呼吸電子傳遞鏈上產生O^2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態。
復合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD⁺，在340nm下測定NADH的氧化速率計算出該酶活性的大小。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、丙tong、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、復合體的提取： 

1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1.0 mL提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心10min。
3. 將上清液移另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
5. 在沉淀中加入400μL提取液，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復15次），用于復合體Ⅰ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。

二、測定步驟：

1. 紫外分光光度計預熱30min 以上，調節波長340nm，蒸餾水調零。
2. 試劑一37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）預熱15min。
3. 操作表：在1mL石英比色皿中分別加入

三、復合體Ⅰ活力單位的計算：  
單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅰ活力（U/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
V 反總：反應體系總體積，10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 mL； T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。
注意事項：

1. 為保證實驗結果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗，如果測定的吸光值過高（高于1.5），可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結果時注意乘以稀釋倍數。若ΔA大于0.4，需將樣本稀釋適當倍數（計算公式中乘以相應稀釋倍數）；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度。
2. 樣品蛋白濃度需自行測定，推薦我公司BCA蛋白濃度測定試劑盒。由于提取液中含有蛋白，所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
3. 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活，若用樣本鮮重計算，則需加測胞漿提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
4. 本試劑盒試劑足夠完成25管反應。
5. 附:使用樣本重量計算公式：（樣本檢測數為25T/12S）

A、上清中復合體I活力的計算:
按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
復合體I活性（U/g）= [ΔA1×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣)÷T
                   =1608×ΔA1÷W。
ΔA1：上清測定值；V 反總：反應體系總體積，10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V提取：加入提取液體積，1mL ；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應時間，2 min；W：樣本重量，g。
B、沉淀中復合體I活力的計算:
按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
復合體I活性（U/g）= [ΔA2×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T
                   =643×ΔA2÷W。

ΔA2：沉淀測定值；V 反總：反應體系總體積，10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm d：比色皿光徑，1cm；V提取：沉淀重懸體積，0.4mL ；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應時間，2 min；W：樣本重量，g。
C、樣本復合體I總活力的計算:
樣本復合體I總活力即為上清中復合體I活力與沉淀中復合體I活力之和。
按樣本鮮重計算：
復合體I（U/g 鮮重）=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W。

相關文獻：

《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying  期刊:Molecular Neurodegeneration 影響因子:8.274 PMID:30466464
《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影響因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Age-dependent expression of the Vitamin D receptor and the protective effect of Vitamin D receptor activation on H2O2-induced apoptosis in rat intervertebral disc cells》 作者:TongTonga1ZhihuiLiub1HuaZhangcJingleiSuncDongxiaZhangdFengWangaDechaoMiaoaYongShen 期刊:Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology 影響因子:3.785 PMID:30905826
《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影響因子:5.657 PMID:30639616
《Nitrogen-doped graphene quantum dots (N-GQDs) perturb redox-sensitive system via the selective inhibition of antioxidant enzyme activities in zebrafish.》 作者:Shun Deng,Ailing Fu,Muhammad Junaid,Yan Wang,Qian Yin,Chen Fu,Li Liu,Dong-Sheng Su,Wan-Ping Bian,De-Sheng Pei 期刊:Biomaterials 影響因子:10.273 PMID:30925289
《The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility》 作者:Fengjiao Jin, Zhaozhen Wu, Xiao Hu, et al. 期刊:Cancer Biol Med 影響因子:4.467 PMID:31119045
《Promotion of Mitochondrial Biogenesis via Activation of AMPK‐PGC1ɑ Signaling Pathway by Ginger (Zingiber officinale Roscoe) Extract, and Its Major Active Component 6‐Gingerol》 作者:Xiaohong Deng , Siwei Zhang,  Junzhen Wu , Xianjun Sun , Ziyin Shen,  Jingcheng Dong  ,Jianhua Huang 期刊:Food Chemistry 影響因子:5.399 PMID:31369153