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胰蛋白酶測定試劑盒的使用介紹

閱讀：657 發(fā)布時間：2022-10-31

　　胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈,是一種重要的消化酶。胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯鍵，生成 BA，BA 在 253nm 處有吸收峰，通過測定 253nm 吸光度增加速率，即可計算出胰蛋白酶的活性。

　　胰蛋白酶測定試劑盒的測定步驟：

　　1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到555 nm，蒸餾水調(diào)零。

　　2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一(V)：試劑二(V)：蒸餾水(V)：試劑三(V)=1 mL：1 mL：5.4 mL：0.4 mL的比例充分混合。(注意：現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個空瓶)

　　3. 吸取25μL樣本，加入975 μL工作液，混勻后立即測定，記錄555nm下1min時的吸光值A(chǔ)1和2min時的吸光值A(chǔ)2。計算△A=A1-A2

　　注意：

　　1、如果△A小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果△A大于0.5，體系迅速變色，可將樣本用提取液稀釋后測定(建議稀釋10倍)，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

　　2、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。

　　3、實驗時要使底物避光保存。

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