elisa試劑盒測定值與文獻中相差太大怎么辦?
(1)、生化測定主要目的是比較處理內和處理間該指標的變化。同時,要測定絕對值,往往是很可能甚至不可能的。因此,追求的不是絕對值而是相對值。
(2)、用不同測定方法和不同測定條件下得到的測定值可能存在很大差異。因此,如果測定方法不同,同一樣品的測定值通常是不可以直接比較的。這也是建議使用試劑盒測定的理由之一。因為不同作者用同一試劑盒測定的數據才是可以相互比較的。
(3)、同一種材料,不同處理、不同發育狀態和不同器官其生化指標可能發生很大變化。因此,能夠直接用來比較的文獻資料本來就不多。
(4)、當然,話說回來,測定值如果與文獻報道相差太大,首先應該檢查單位是否一致,包括摩爾還是毫摩爾,是干重、鮮重還是蛋白質濃度,是分鐘還是秒,等等。其次,檢查計算是否有誤?最后,如果相差不是數量級,通常是很正常的。
elisa試劑盒反應五要素有哪些?
(1)、引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
(2)、引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
(3)、避免引物內部出現二級結構,ELISA試劑盒避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
(4)、引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
(5)、引物3'端的堿基,特別是末及倒數第er個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
(6)、引物中有或能加上合適的酶切位點, ELISA試劑盒被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
(7)、引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
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