人腫瘤壞死因子αⅡ型受體ELISA試劑盒

人腫瘤壞死因子αⅡ型受體ELISA試劑盒必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售，用我們拜力生物的*培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)更省心！"

供應(yīng)商 :拜力生物

貨期 :7-10天

1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

要產(chǎn)品包括限制性內(nèi)切酶，聚合酶，修飾酶，各種載體， Marker ， 引物，測序，基因突變系統(tǒng)，噬菌體呈現(xiàn)，蛋白質(zhì)工具（蛋白激酶，磷酸酶，糖生物學(xué)，蛋白酶）。該公司產(chǎn)品線主要分為以下九大方面：①限制性內(nèi)切酶；②聚合酶與擴(kuò)增技術(shù)；③DNA修飾酶與克隆技術(shù)；④核酸；⑤RNAi與RNA酶；⑥基因表達(dá)和蛋白純化技術(shù)；⑦感受態(tài)細(xì)胞；⑧蛋白質(zhì)工具；⑨表觀遺傳學(xué)。

◇      液體類標(biāo)本

標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      血漿：

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      尿液、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

在生物制品方面，我公司是世界衛(wèi)生組織下屬生物標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)室（英國生物制品檢定所NIBSC和荷蘭VQC）、歐洲藥品質(zhì)量監(jiān)察會（EDQM）在中國的進(jìn)口商，同時我部門也在代理進(jìn)口一些其他菌種保藏機(jī)構(gòu)的產(chǎn)品，比如德國國家菌種保藏中心(DSMZ)、英國國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏中心(NCTC)等，為國內(nèi)科研以及生產(chǎn)用戶提供細(xì)胞株、菌株等生物標(biāo)準(zhǔn)品。
收到后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。
注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

無菌操作注意事項(xiàng):
1）操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2）點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時間不能太長，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。
3）操作動作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加污染機(jī)會。
4）不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要布局合理。
5）瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6）吸溶液的吸管等不能混用。
標(biāo)準(zhǔn)蛋白表達(dá)服務(wù)
1. 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上；
2. 制備重組bacmid DNA；
3. bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，制備P1和P2病毒stock；
4. P2病毒滴度測定
5. 重組蛋白表達(dá)評估和條件優(yōu)化；
6. 小規(guī)模蛋白表達(dá)和純化（500 ml培養(yǎng)物）；
7. 大規(guī)模蛋白表達(dá)和純化（可選）。
病毒制備服務(wù)
1. 克隆目標(biāo)蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上；
2. 制備重組bacmid DNA；
3. bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，制備P1和P2病毒stock；
4. P2病毒滴度測定（滴度108－109）；
5. 蛋白表達(dá)驗(yàn)證；
6. P3病毒制備（可制備3L重組桿狀病毒）。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

儀器(Instruments)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)(Cell Fusion, Transfection, Culture)、體外翻譯(In vitro Translation)、抗體(Antibodies)、檢測試劑盒(ELISA & Detection Kits ELISA)、生物醫(yī)學(xué)相關(guān)(Biomedical)、蛋白質(zhì)、多肽&糖類(Proteins, Peptides & Sugars)、化學(xué)試劑(Chemicals)、分子生物(DNA Molecular Biology)

現(xiàn)在一般完整的試劑盒應(yīng)該有一下幾個組成：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；

（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。