人軍團菌抗原(LPAg)ELISA Kit

人軍團菌抗原(LPAg)ELISA Kit標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。

培養基 :"*培養基有售，用我們乾思生物的*培養基，細胞培養更省心！"

供應商 :乾思生物

貨期 :7-10天

1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

洗板方法

1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。

2.  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

  以標準物的濃度為縱坐標(對數坐標)，OD值為橫坐標(對數坐標)，在對數坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

 ◇      注意事項：

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分標本需添加抑肽酶。

◇      液體類標本

標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

◇      血漿：

應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

◇      尿液、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

◇      細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

◇      組織標本：

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

【生物分子】 抗生素/抗真菌素 維生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖類 白三烯 前列腺素 藥物結合物 抗氧化劑 藥理活性化合物 類固醇激素結合物 半抗原反應 半抗原載體結合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 親和素/鏈霉親和素
【蛋白質/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封閉肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 細菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 細胞質蛋白 總蛋白 膜蛋白 核蛋白 細胞裂解和提取物 線粒體蛋白 細胞裂解 組織提取 重組細胞因子 
【常用生化試劑】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物學緩沖液 蛋白生化緩沖液 去垢劑 染色試劑 溶劑 酸堿 化學試劑 其它生化試劑
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR試劑 PCR對照 特異性PCR試劑盒 PCR克隆試劑盒 RNA 載體及構建 PCR克隆載體 M13克隆載體 細菌克隆載體 文庫及構建 cDNA文庫 基因組文庫 噬菌體展示文庫
【酶】限制性內切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 連接酶
【cDNA及合成純化】cDNA全長基因 RNA cDNA合成 cDNA相關試劑
【核酸/蛋白合成】Oligo純化 核酸合成柱 核酸合成試劑
【克隆與表達】克隆基因 克隆試劑盒 克隆篩選
【表達分析】 Northern印跡分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝膠制備 蛋白電泳試劑 預制蛋白凝膠
【核酸純化】 DNA凝膠純化 DNA提取純化 PCR產物純化
【RNAi技術】 siRNA 反義寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文庫
【蛋白檢測】 Western印跡 報告基因檢測 蛋白檢測試劑盒
【實驗動物】 轉基因動物 小鼠 大鼠 模式動物
【臨床檢測試劑】 生化檢測 遺傳學檢測 血液檢測
【相關檢驗試劑】 食品安全檢測 藥品安全檢測
【蛋白純化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白穩定
【細胞培養】 血清 血清替代物 細胞培養基 細胞 細胞株 感受態細胞 新鮮細胞分離
【干細胞】 干細胞/祖細胞 原代細胞 干細胞培養基
【蛋白修飾】 蛋白標記 載體蛋白結合 其它
【細胞生物學檢測】 細胞凋亡 細胞分離 細胞增殖
【藥物篩選】 熒光素細胞活力/增殖/毒性檢測
【免疫檢測】 放射性免疫檢測 化學發光免疫檢測

在生物制品方面，我公司是世界衛生組織下屬生物標準品實驗室（英國生物制品檢定所NIBSC和荷蘭VQC）、歐洲藥品質量監察會（EDQM）在中國的進口商，同時我部門也在代理進口一些其他菌種保藏機構的產品，比如德國國家菌種保藏中心(DSMZ)、英國國立標準菌種收藏中心(NCTC)等，為國內科研以及生產用戶提供細胞株、菌株等生物標準品。
收到后，取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。
(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又將培養瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養培養瓶，細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養基，吸出，分到新的培養瓶中。一傳二。
注意：傳代后一半用我們的培養基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。

無菌操作注意事項:
1）操作前要洗手，進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2）點燃酒精燈，操作在火焰附近進行，耐熱物品要經常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時間不能太長，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過營養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。
3）操作動作要準確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加污染機會。
4）不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要布局合理。
5）瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6）吸溶液的吸管等不能混用。
標準蛋白表達服務 
1. 克隆目標蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉移載體上；
2. 制備重組bacmid DNA；
3. bacmid DNA轉染昆蟲細胞，制備P1和P2病毒stock；
4. P2病毒滴度測定
5. 重組蛋白表達評估和條件優化；
6. 小規模蛋白表達和純化（500 ml培養物）；
7. 大規模蛋白表達和純化（可選）。 
病毒制備服務 
1. 克隆目標蛋白編碼序列到合適的桿狀病毒轉移載體上；
2. 制備重組bacmid DNA；
3. bacmid DNA轉染昆蟲細胞，制備P1和P2病毒stock；
4. P2病毒滴度測定（滴度108－109）；
5. 蛋白表達驗證；
6. P3病毒制備（可制備3L重組桿狀病毒）。 
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

儀器(Instruments)、細胞融合、轉染、培養(Cell Fusion, Transfection, Culture)、體外翻譯(In vitro Translation)、抗體(Antibodies)、檢測試劑盒(ELISA & Detection Kits ELISA)、生物醫學相關(Biomedical)、蛋白質、多肽&糖類(Proteins, Peptides & Sugars)、化學試劑(Chemicals)、分子生物(DNA Molecular Biology)

 現在一般完整的試劑盒應該有一下幾個組成：

 （1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標記的抗原或抗體（結合物）；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（5）結合物及標本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（7）酶反應終止液，常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。