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產品名稱:人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統
產品貨號:CellArtis Y30021
產品品牌:TAKARA/ CellArtis
英文名稱:Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit
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從開始到結束:人iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統
人誘導多能干細胞(Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)是一個功能強大的研究工具和疾病模型,因為其具備增殖、自我更新、分化為多種細胞類型的能力。此外,人iPS細胞還可以再現細胞來源個體的疾病表型和基因型。將人iPS細胞結合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術,可以在同基因的細胞系中研究特定基因改變引起的功能影響,因為基因編輯過的人iPS細胞能提供可再生的、無遺傳變異的患病細胞和健康細胞資源。
CRISPR/Cas9系統已經成為一個強大的基因編輯工具,因為其高的靶向特異性,編輯效率和易用性。該技術的強大主要源于它的簡單,因為全部只需要一個Cas9核酸酶結合一個單鏈向導RNA(single guide RNA,sgRNA) 就可以決定靶向特異性(Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的(RNA-programmable)方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining,NHEJ) DNA修復途徑的易錯特性,進而產生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組(homology-directed repair,HDR)途徑被用于基因敲入。
CRISPR/Cas9系統的組件可以通過多種方法成功導入至靶細胞,包括基于載體的表達系統,RNA轉染, 導入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)復合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比,直接導入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉入基因編輯實驗的方法,同時脫靶效應的可能性更小(Kim et al. 2014)。
一旦Cas9/sgRNA RNP復合物被導入,為了分離和篩選感興趣的基因型,單細胞必須被分離并擴增為克隆細胞系。傳統上,從基因編輯的hiPS細胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰性的和耗時的,因為hiPS 細胞是以集落生長和傳代的。通常,這會導致細胞死亡和提前分化。然而,Cellartis單細胞克隆系統包含一個成分確定的培養系統(由基礎培養基,包被劑,和添加劑組成),用于有效形成單細胞克隆和擴增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養的系統,規避了集落狀培養帶來的挑戰,允許單細胞傳代和促進接種的單細胞存活和后續擴增。
Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的,在無飼養層和成分確定條件下,用于hiPSCs有效擴增和擴大生產的系統。試劑盒包含了從接種單細胞至96孔板到擴增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細胞克隆擴增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。
產品特點:
1.成分確定的,無血清,無飼養層培養
2.All-In-One型: 培養基+添加劑+包被劑維持良好的多能性狀態,背景分化低
3.細胞非集落狀均勻生長,輕松單細胞傳代
4.單個干細胞基因操作實驗的理想選擇
產品名稱:人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統
產品貨號:CellArtis Y30021
產品品牌:TAKARA/ CellArtis
英文名稱:Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit
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