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產品名稱： Stemcell  Lymphoprep 淋巴細胞分離液

產品貨號:  07851

產品規格：500 ml

產品品牌：Stemcell

產品簡介：

Lymphoprep是一種無菌、內毒素含量低的即用型分離液，是目前國內外分離正常人或病人外周血單個核細胞(PBMC:Mononuclear cells of Peripheral blood)(包括單核細胞monocytes和淋巴細胞lymphocytes)的常用方法，具有與昂貴的GE公司的PLUS或PREMIUM分離液同樣的指標。

產品應用

人外周血、骨髓和臍帶血淋巴細胞分離

骨髓、胎盤間充質干細胞分離

產品參數：

成分：泛影葡胺鈉(Sodium diatrizoate)：9.1% (w/v)；多糖：5.7% (w/v)

密度：1.077±0.001g/ml

滲透性：290±15mOsm

內毒素含量：<1.0EU/ml

分離所得PBMC中紅細胞的含量：整個細胞數目的3-10%。

產品原理

PBMC與血液中的其他成分存在密度差異，利用密度在1.077±0.001g/ml之間而且近于等滲的LymphoprepTM溶液作密度梯度離心時，紅細胞和粒細胞由于密度大，故沉于分離液底部。PBMC密度稍低于分離液，故位于分離液界面上，獲得PBMC。LymphoprepTM分離液含有多糖（polysacccharide）,多糖能粘附在細胞表面，使紅細胞和粒細胞聚集下沉，但它對淋巴細胞的活性和紅細胞和粒細胞進一步分離有負面影響。

注意事項：

該分離液僅適用于人體的外周血液，不適用于動物。

使用該分離液時，需將待分離的血液用生理鹽水做等體積的稀釋。

分離液的保存應置于無菌環境，并避光保存。

詳細操作步驟見產品說明書。

操作步驟（僅供參考）

第一步、

在含有抗凝劑（EDTA、heparin、或ACD）的管子內收集血液，或者用去纖維蛋白的血液。此處抗凝劑的選擇取決于得到淋巴細胞以后，后續實驗的要求，一般選取EDTA即可。

第二步、

用等體積的0.9%的NaCl溶液（即生理鹽水）稀釋血液。

第三步、

在12-15ml的離心管內，將6ml稀釋后的血液鋪在3ml分離介質Lymphoprep上。

此處鋪層可以采用從上面鋪，或從下面鋪兩種方法。鋪層的關鍵是不能讓血液和分離液混在一起，要界面分層清晰。

第四步、

在室溫下——20攝氏度左右，用水平轉子，800g的離心力，離心20分鐘。（如果血液存放時間超過2小時——從人體抽出算起，離心時間延長為30分鐘）。

第五步、

離心后，離心管內位于血液和分離液界面處的明顯的一層即為淋巴細胞層。

用移液管直接吸取淋巴細胞層，注意，不要去除上面的血液層，而是直接吸取。移至另一離心管中。

第六步、

用大約2倍體積的0.9%的NaCl溶液（生理鹽水）稀釋收集到的淋巴細胞，在250g-300g的離心力下，離心10分鐘，（此處在加上稀釋液后的體積在15ml離心管內不宜超過5-6ml，體積過大，會降低淋巴細胞的產率），收集沉淀，即得到所需的人外周血單個核細胞，即可用于后續的實驗。

產品名稱： Stemcell  Lymphoprep 淋巴細胞分離液

產品貨號:  07851

相關定義：

Ficoll密度梯度離心

常用來分離人外周血單個核細胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。

單個核細胞

外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。

這是一個含義不明確的術語，常用于指組織切片或血液白細胞組分中的單個核吞噬細胞系統或淋巴細胞或兩者的混合物，是相對于多形核細胞而言的。

血細胞和密度

利用細胞的比重不同，可把血細胞分成不同的比重層次，外周血中紅細胞和多形核粒細胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細胞和單核細胞比重較小，為1.075～1.090。配制比重介于1.075～1.090之間的等滲液，通常用聚蔗糖(商品名Ficoll)與泛影葡胺，用此比重的等滲液作密度梯度離心，使比重大于此比重的紅細胞、多形核粒細胞沉于管底，淋巴細胞和單核細胞浮于分層液與血液界面上，可用吸管吸出。這種方法分離出的淋巴細胞和單核細胞稱為單個核細胞。在干細胞采聚過程中，外周血或骨髓中的造血干細胞比重亦與淋巴細胞和單核細胞相同。因而，分離的單個核細胞中含有造血干細胞。

血液中的細胞成分。根據細胞質中有無血紅蛋白，血細胞被分為紅細胞和白細胞。白細胞根據其胞質中有無顆粒又分為有粒白細胞和無粒白細胞。有粒白細胞又根據其顆粒的染色特性分為嗜酸粒細胞、嗜堿粒細胞和中性粒細胞。無粒白細胞又根據其大小、核質比例和染色性質分為單核細胞和淋巴細胞。