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血清在細(xì)胞培養(yǎng)中常見問題

閱讀:1663      發(fā)布時(shí)間:2021-6-25
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? 正常情況下,融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是?
血清為動(dòng)物來源,成分復(fù)雜,不同批次間會(huì)存在一些外觀上的差別。一般情況下,它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。


? 血清應(yīng)如何保存?
未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃,避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃,在產(chǎn)品質(zhì)量證書標(biāo)識(shí)的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。


? 血清的有效期是多久?
大部分康寧血清效期是5年,針對(duì)每個(gè)批次,請(qǐng)通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。


? 血清應(yīng)如何融解?
從冰箱中取出血清,放于2-8℃融化,融化過程中不時(shí)旋轉(zhuǎn)(swirling mix)混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用


? 為什么有時(shí)血清中出現(xiàn)絮狀沉淀?是否需要去除?如何去除?
多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成,最常見的原因之一是融化過程中,脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。可以400g離心5分鐘,取上清,然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。


? 為什么存放于冰箱中的血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?如何避免該現(xiàn)象?
在2-8°C條件下存放,血清中的多種蛋白或脂蛋白會(huì)形成肉眼可見的沉淀,如血纖蛋白(fibrin),單體時(shí)處于溶解狀態(tài),在凍融過程中會(huì)發(fā)生聚集,形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會(huì)影響血清的性能。可以400g離心5分鐘,取上清,然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象,建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱,避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長(zhǎng)時(shí)間放置。


? 血清是否需要做滅活處理?
這取決于您的應(yīng)用。
滅活過程中,會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長(zhǎng)因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí),才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。最常見的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白,因?yàn)檠a(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷,巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化,肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過程中需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。


? 如何進(jìn)行血清滅活處理?
血清請(qǐng)先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻,熱滅活時(shí)請(qǐng)將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對(duì)血清品質(zhì)的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。最好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計(jì),加熱過程中不時(shí)輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,當(dāng)溫度計(jì)顯示達(dá)到56℃左右,開始計(jì)時(shí)。56 ℃水浴后,建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。


? 為什么需要對(duì)血清進(jìn)行g(shù)amma射線輻照?
gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒,一般情況下,25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。


? 什么情況下需要無Ca2+/Mg2+離子的PBS?
取決于您的研究應(yīng)用。除了一些Ca2+/Mg2+會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)以外,一般在胰酶消化前,建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細(xì)胞,因?yàn)镃a2+/Mg2+會(huì)抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細(xì)胞需要繼續(xù)培養(yǎng),建議消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗,因?yàn)镃a2+/Mg2+有助于細(xì)胞的貼壁過程。另外,若需要在緩沖液中長(zhǎng)時(shí)間保存細(xì)胞,也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。


? 康寧無Ca2+/Mg2+離子的PBS和DPBS的區(qū)別是什么?
取決于您的研究應(yīng)用。除了一些Ca2+/Mg2+會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)以外,一般在胰酶消化前,建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細(xì)胞,因?yàn)镃a2+/Mg2+會(huì)抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細(xì)胞需要繼續(xù)培養(yǎng),建議消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗,因?yàn)镃a2+/Mg2+有助于細(xì)胞的貼壁過程。另外,若需要在緩沖液中長(zhǎng)時(shí)間保存細(xì)胞,也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。


? 康寧是否有注射級(jí)別(WFI)的水?
康寧細(xì)胞培養(yǎng)用水按照USP和/或EP 中對(duì)注射用水(WFI)的無菌要求進(jìn)行質(zhì)控,但康寧的該類產(chǎn)品為科研用產(chǎn)品,非臨床注射用水。


? 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么?
鈣離子會(huì)抑制胰酶活性,EDTA作為鈣離子螯合劑,可以去除鈣離子,有助于胰酶更好發(fā)揮消化細(xì)胞的功能


? 為什么在使用胰酶前要先清洗貼壁細(xì)胞?
目前大部分情況下,細(xì)胞培養(yǎng)液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分,如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用無鈣鎂離子的緩沖液清洗細(xì)胞。

 

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