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進階的PCR,了解一下
盤點PCR技術
PCR技術是模擬體內DNA的天然復制過程,在體外擴增DNA分子的一種分子生物學技術,主要用于擴增位于兩段已知序列之間的DNA區段。
PCR技術自1983年Kary Mullis發明以來,在經典的梯度PCR基礎上,又拓展了新的PCR技術。不同PCR技術的涌入,急速壯大了PCR家族。
篇幅有限,先從入門級PCR涉及到的Hot start PCR(熱啟動PCR)、Long PCR(長片段PCR)、Touchdown PCR(降落PCR)開始講起。
在模塊溫度到達設定的變性溫度之前,模塊內的樣品往往要一起經歷加熱的過程,此時Taq酶仍具有一定活性,部分的引物和模板會在酶的作用下進行非特異性的結合、延伸,消耗反應物, 導致特異性擴增減少。目前一般采用溫控系統或使用特殊Taq酶避免此現象的發生,稱之為熱啟動PCR。
Long PCR(長片段PCR)則可以滿足較長片段的DNA片段的擴增需求,常用Taq酶和Pfu酶混合使用并配以特殊的緩沖液,避免錯誤的dNTP加入到片段中。在正常10-15個循環之后,每一個循環的延伸時間都要上一次循環的延伸時間多出10秒左右,以此配合完成正確的延伸。
由于影響PCR效率的因素有很多,比如引物、退火溫度,循環次數等,逐一驗證選擇適條件會花費大量的時間及成本,因此,降落PCR是針對一系列不太的退火時間來考量的:退火溫度的起始值高于T值15℃,每一個(或n個)循環后比之前的循環的退火溫度都要低,直到溫度等于或低于T值,此后,在低溫環境下再進行幾個循環,以此達到特異性擴增的目的。高溫環境能使部分特異性結合發生,再降溫,某些非特異性擴增已不具備優勢,因此能夠擴增。
以上三種PCR都可以在寶予德FastAmp 基因擴增儀上得以實現,不僅如此,美國Marlow半導體具備的溫控性能,大變溫速率為6.5℃/S,三種模塊可選擇,10英寸顯示觸摸屏帶給您更好地操作體驗!