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產(chǎn)品型號(hào)
品 牌GEMIG
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2024-11-19 16:59:59瀏覽次數(shù):1417次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)Masson染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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免疫熒光三標(biāo)四色(芯片)
服務(wù)介紹:
組織芯片的免疫熒光檢測(cè),是將許多不同個(gè)體組織標(biāo)本以規(guī)則微陣列方式排布于同一載玻片上,同時(shí)進(jìn)行相同指標(biāo)的免疫熒光檢測(cè)。組織芯片熒光三標(biāo)實(shí)驗(yàn)室在同一張組織芯片上對(duì)三個(gè)抗原進(jìn)行同時(shí)標(biāo)記,從而實(shí)現(xiàn)定性,定位,半定量分析。 組織芯片的免疫熒光檢測(cè),標(biāo)本體積小, 標(biāo)本信息含量大 , 一次性實(shí)驗(yàn)即可獲大量結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條件更易控制一致,減少批間批內(nèi)誤差,結(jié)果更準(zhǔn)確。
名稱(chēng) | 規(guī)格 |
免疫熒光三標(biāo)四色(芯片) | 張 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。
2. 抗原修復(fù):組織切片置于盛滿(mǎn)EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火8min?;?min轉(zhuǎn)中低火7min,此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來(lái)確定)
3. 畫(huà)圈:切片稍甩干后用組化筆在組織周?chē)?huà)圈(防止抗體流走)
4. 血清封閉:在圈內(nèi)滴加BSA孵育30min。(一抗若是山羊來(lái)源,則加兔血清)
5. 加第一種一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))
6. 加對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。
7. 加CY3熒光增強(qiáng)劑:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加CY3熒光增強(qiáng)劑,避光室溫孵育10min. 孵育完后,玻片置于TBST中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min
8. 微波處理:組織切片置于盛滿(mǎn)EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理,中火8min停火8min轉(zhuǎn)中低火7min,去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā),切勿干片。
9. 加第二種一抗:在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))
10. 加對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
11. 加FITC熒光增強(qiáng)劑:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加FITC熒光增強(qiáng)劑,避光室溫孵育10min. 孵育完后,玻片置于TBST中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min
12. 微波處理:組織切片置于盛滿(mǎn)EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理,中火8min?;?min轉(zhuǎn)中低火7min,去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā),切勿干片。
13. 加第三種一抗:在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))
14. 加CY5標(biāo)記的熒光二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的CY5標(biāo)記熒光二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。孵育完后,玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
15. DAPI復(fù)染細(xì)胞核:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
16. 自發(fā)熒光淬滅:切片稍甩干后,在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min,流水沖洗10min。
17. 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
18. 鏡檢拍照:切片置于掃描儀下采集圖像。(DAPI紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm,發(fā)射波長(zhǎng)420nm,發(fā)藍(lán)光;FITC激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm,發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm,發(fā)綠光;CY3激發(fā)波長(zhǎng)510-560,發(fā)射波長(zhǎng)590nm,發(fā)紅光. CY5激發(fā)波長(zhǎng) 608-648nm, 發(fā)射波長(zhǎng)672-712,,CY5原本為正紅色,為了與CY3區(qū)分開(kāi),我們?cè)O(shè)定為粉色光。 DAPI染出來(lái)的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色,陽(yáng)性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光,粉光,綠光 。
送樣運(yùn)輸要求:
1、樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運(yùn)輸送樣。切勿固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng),切勿冷凍結(jié)冰。
2、熒光三標(biāo)只能做石蠟包埋切片,不能做冰凍切片和細(xì)胞爬片。
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