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木聚糖酶(檢測服務)
服務介紹:
木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下可以與3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑發生顯色反應。反應液顏色的深度與酶解產生的還原糖量成正比,而還原糖的生成量又與反應液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通過測定反應液顏色的強度,可以計算反應液中木聚糖酶的活力。
背景介紹:
木聚糖酶(Xylanase)又稱戊聚糖酶,是指能專一降解木聚糖為低聚木糖和木糖的水解酶。它是一組復雜的復合酶系,主要包括β-1,4-木聚糖酶和β-木糖苷酶等。木聚糖酶的活性來源于經選擇的木霉菌等微生物,經過基因工程的轉化、發酵、提取而得。
木聚糖酶在自然界分布廣泛,可從動物、植物和微生物中獲得。微生物來源的木聚糖酶普遍存在于自然界中,且種類繁多,應用領域廣泛。目前研究和應用得最多的是細菌和真菌來源的木聚糖酶,其中細菌可以產生堿性和酸性木聚糖酶。
應用:
1、改善消化系統功能:木聚糖酶可以分解食物中的木聚糖,使食物更容易被人體消化和吸收,還可以促進腸道蠕動,有助于改善便秘、消化不良等癥狀。
2、促進營養物質的吸收:木聚糖酶可以分解食物中的蛋白質、脂肪等營養物質,使其更容易被人體吸收利用,有助于增強體質,提高免疫力。
3、工業應用:木聚糖酶在釀造、飼料工業中也有廣泛應用。它可以分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質的釋放,以及降低飼料用糧中的非淀粉多糖,促進營養物質的吸收利用。
操作步驟(僅供參考):
1、準備樣品:
①固體樣品稱取試樣兩份,精確至0.001 g。 加入4ml Assay buffer,充分溶解,并定容至10 ml,在4 °C條件下避光保存1~2h。1000g離心3~5min,取上清液,再用Assay buffer做適當稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之間)。
②液體樣品可以直接用Assay buffer稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在 0.04~0.10 U/ml之間)
2、配制木聚糖溶液:準確稱取0.15g 木聚糖,使充分溶解于8ml去離子和5ml NH水溶液(3×)中,通過pH計測定,用YS溶液調節pH至5.5~5.6,補水至15ml
2、配制NH水溶液(1×):取1份NH水溶液(3×)和2份去離子水混合即成。
3、標準曲線繪制:取8支離心管按下表設置,準確吸取木糖標準(10mg/ml)與Assay buffer,即得不同濃度的木糖梯度標準。
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
木糖標準(10mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.07 |
Assay buffer | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 | 0.93 |
木糖標準(mg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 |
取1支離心管,加入0.08mlAssay buffer和0.1mlDNS試劑,混勻,沸水浴加熱5min,自來水冷卻至室溫,加NH水溶液(1×)0.32ml,即為空白管。另取7支離心管,加入0.04ml 37℃預熱的Assay buffer、0.04ml木糖梯度標準和0.1mlDNS試劑,混勻,沸水浴加熱5min,自來水冷卻至室溫,加NH水溶液(1×)0.32ml,即為標準管。以空白管調零,酶標儀測定540nm處各管的吸光度。
測定樣品
①取適量的木聚糖溶液和酶提取液置于不同的離心管中,37°C 平衡 20 min;木聚糖溶液使用之前應充分搖勻。
②取2支離心管按下表設置依次加入相應試劑:
加入物(ml) | 對照管 | 測定管 |
酶提取液 | 0.04 | 0.04 |
Assay buffer | 0.04 | - |
木聚糖溶液 | - | 0.04 |
37℃水浴30min | ||
DNS試劑 | 0.1 | 0.1 |
立即搖勻,放入沸水浴中顯色5min, 立即取出,流水冷卻至室溫,加 NH水溶液(1×)0.32ml |
以空白管調零,酶標儀測定540nm處對照管和測定管的吸光度(分別記為A1、A0)。
實驗結果:
全自動生化儀檢測后導出結果,結果由EXCEL形式發送。
送樣須知:
1.南京和上海地區的客戶可提供上門取樣服務,提前一天聯系
2.外地客戶可郵寄樣本,樣本運輸應符合一般的生物學要求,密封加冰袋或者干冰運輸
3.若細胞、血清、組織樣本具有潛在的傳染性或致病性,請務必提前告知
4.測試結束提供實驗報告后,樣本可以保留1個月,若需保留樣本或者回收樣本請提前告知。
備注:本公司對客戶的項目的專有技術和資料(包括實驗方案,測試結果,樣本等)負有絕對保密的責任。
僅供科研實驗用,不做其他用途!
木聚糖酶(檢測服務)
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