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ACE2是介導新冠病毒侵入的受體。然而，新冠病毒也被發現可以侵染ACE2陰性細胞，這意味著“狡猾”的新冠病毒還可能存在其他受體。

 

 

圖1. TMEM106B/S蛋白復合物結構解析發現TMEM106B結合S蛋白的RBD結構域，其中S蛋白上的484位Asp以及TMEM106B的LD（管腔結構閾）的Met210/Phe213是結合界面上的重要氨基酸殘基

那么兩者的親和力如何呢？上Octet® 非標記分子互作系統!

結果顯示，TMEM106B與S蛋白有著明顯的結合，但是TMEM106B突變M210和F210位點后，就沒有結合了，數據證實了復合物結構解析的結論。

最近出現的比利時毒株的S蛋白484位為天冬氨酸（D484），而最初毒株為谷氨酸（E484）。用Octet® 檢測發現，D484的S蛋白親和力比E484強，也解釋了D484的侵染性更強的原因。

TMEM106B結合S蛋白的RBD結構域也是ACE2的結合區域，那么ACE2會不會與TMEM106B競爭結合S蛋白呢？

Octet® 的一系列實驗結果在分子水平上驗證了復合物結構解析的結果。但是，如何在細胞學水平上證實TMEM106B與S蛋白的結合呢？是時候發揮Incucyte® 實時活細胞分析系統的威力了！

文章進行了細胞-細胞融合試驗：通過ACE2或TMEM106B、S蛋白（帶綠色熒光）轉染HEK293T細胞，使其在表面表達這些蛋白；如果TMEM106B與S蛋白發生結合，細胞可以融合形成更大的細胞團。

總結

距離新冠病毒被發現已經有三年多的時間了，雖然許多人早已經歷過兩次“陽”性，但我們依然不能高枕無憂，新冠病毒仍有可能卷土重來。因此，對它的侵染機理進行研究仍然是至關重要的，只有進行更多的基礎研究，才能為藥物研發指明方向。該文作者以TMEM106B為靶點篩選到一些抗體，并發現這些抗體能阻止新冠病毒對細胞的侵染。雖然也有其他文章發現了除ACE2外的其它新冠病毒受體，但該文不僅結合多種手段對復合物結構進行解析，而且用Octet®、Incucyte® 等手段進行了驗證，因此，可信度很高，這也是本文能夠被CELL收錄的原因之一。

• 培養箱內可長達數周的連續觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害；這篇文章每隔3個小時拍攝，連續拍攝3天

• 6個板位，分別獨立設置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養皿，通量高

• 高效簡便的模塊化軟件設置和數據分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數；本文提到了使用Incucyte® 通過設置熒光目標面積大小對一些未融合的細胞進行過濾，使得結果更加準確

• 大于100種優化過的活細胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol，文章數大于14000篇，是長時間活細胞成像產品中的佼佼者

• 非標記Direct Binding是趨勢，它的結果更準確

• 快速測定親和力，更加定量化對互作進行表征

• 無洗滌步驟，可測弱親和力（解離快）；本文的結合就是典型的快解離

• 測試時間短，一般10-20分鐘，更快拿到結果

• 實驗形式多樣化：定性，兩者結合，協同/競爭實驗，垂釣

• 寫入美國藥典，文章>13,000篇，認可度廣

• 萬金油技術，可以用與檢測DNA、小分子、蛋白等各種生物分子

• 使用方便，成本相對低

下載文檔

參考文獻

[1] TMEM106B is a receptor mediating ACE2- independent SARS-CoV-2 cell entry.Cell,2023